应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 定点突变蛋白质不表达
141/2返回列表12下一页
查看: 2973  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

xdfy0301

新虫 (初入文坛)

[求助] 定点突变蛋白质不表达 已有1人参与

近期，做了几个点的定点突变，突变点是通过软件模拟得到的。通过突变，转化发酵，结果突变体没有酶活。突变体DNA测序表明突变正确，没有移码。但未能找到不表达的原因，向各位求助，指点一下何种原因导致不表达，谢谢。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-11-22 20:15:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zh10246

铁杆木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-23 01:23:52
xdfy0301: 金币+2 2013-11-24 20:09:55
定点突变蛋白质不表达和结果突变体没有酶活不是一回事吧，你的蛋白是否表达呢，做个western看看
赞一下 回复此楼
2楼2013-11-22 20:40:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xdfy0301

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zh10246 at 2013-11-22 20:40:22
定点突变蛋白质不表达和结果突变体没有酶活不是一回事吧，你的蛋白是否表达呢，做个western看看

跑过SDS变性电泳，没有目的条带（正常目的条带很粗）因此，推测为没有表达
赞一下 回复此楼
3楼2013-11-23 16:31:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

南子枫

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xdfy0301: 金币+1 2013-11-24 20:10:03
难道是你突变的位点对表达有重要作用？
RT-PCR看看有没有转录活性如何？
赞一下 回复此楼
4楼2013-11-23 19:31:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

w_goodluck

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

楼主！我和你遇到是同样的问题！我推测应该是没有表达！
理由如下：
我用pET28a连接了一个目的基因（野生型），然后去做蛋白表达，SDSPAGE显示表达强度很高（条带很明显）。
然后我自己设计引物做了一轮定点突变，测序结果正确，同样去做蛋白表达，但是SDSPAGE就没有对照条带。
我推测的结果是没有表达，但是没有表达的原因说不清楚，感觉特别奇怪。
赞一下 回复此楼
5楼2013-12-05 20:14:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

w_goodluck

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

还有一种可能，就是这种突变酶（突变蛋白）可能严重的改变了空间结构，导致结构不稳定，在表达的时候被快速降解了（就是半衰期可能特别短）。
赞一下 回复此楼
6楼2013-12-05 20:19:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xdfy0301

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 南子枫 at 2013-11-23 19:31:00
难道是你突变的位点对表达有重要作用？
RT-PCR看看有没有转录活性如何？

请问 有什么软件可以分析这个位点的mRNA吗
赞一下 回复此楼
7楼2013-12-06 11:02:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xdfy0301

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by w_goodluck at 2013-12-05 20:14:03
楼主！我和你遇到是同样的问题！我推测应该是没有表达！
理由如下：
我用pET28a连接了一个目的基因（野生型），然后去做蛋白表达，SDSPAGE显示表达强度很高（条带很明显）。
然后我自己设计引物做了一轮定点突变 ...

你是针对其什么特性做的突变
赞一下 回复此楼
8楼2013-12-06 11:05:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

w_goodluck

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by xdfy0301 at 2013-12-06 11:05:09
你是针对其什么特性做的突变...

是我们之前发现这个基因发生的某个突变导致了菌株成为了营养缺陷型（应该是该酶失活了）。做的就是这个基因突变，没有做过相应的分析。
赞一下 回复此楼
9楼2013-12-06 11:52:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

南子枫

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by xdfy0301 at 2013-12-06 11:02:42
请问 有什么软件可以分析这个位点的mRNA吗...

为什么分析mRNA？不用吧
赞一下 回复此楼
10楼2013-12-07 17:28:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 xdfy0301 的主题更新
141/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 318求调剂 +3 plum李子 2026-03-21 6/300 2026-03-22 11:35 by plum李子
[考博] 招收博士1-2人 +3 QGZDSYS 2026-03-18 4/200 2026-03-22 10:25 by QGZDSYS
[基金申请] 山东省面上项目限额评审 +4 石瑞0426 2026-03-19 4/200 2026-03-22 08:50 by Wei_ren
[考研] 一志愿华中科技大学071000，求调剂 +4 沿岸有贝壳6 2026-03-21 4/200 2026-03-22 07:21 by ilovexiaobin
[考研] 化学工程321分求调剂 +18 大米饭！ 2026-03-15 22/1100 2026-03-21 20:20 by HH领袖
[考研] 297求调剂 +11 戏精丹丹丹 2026-03-17 12/600 2026-03-21 17:47 by ColorlessPI
[考研] 求调剂 +3 .m.. 2026-03-21 4/200 2026-03-21 16:25 by barlinike
[考研] 材料与化工（0856）304求 B区 调剂 +3 邱gl 2026-03-21 3/150 2026-03-21 13:47 by lature00
[考研] 316求调剂 +6 梁茜雯 2026-03-19 6/300 2026-03-21 06:32 by Ecowxq666！
[考研] 307求调剂 +10 冷笙123 2026-03-17 10/500 2026-03-21 01:54 by JourneyLucky
[考研] 一志愿南京理工大学085701资源与环境302分求调剂 +4 葵梓卫队 2026-03-18 6/300 2026-03-20 23:02 by JourneyLucky
[考研] 287求调剂 +7 晨昏线与星海 2026-03-19 8/400 2026-03-20 22:19 by JourneyLucky
[考研] 085600材料与化工 +8 安全上岸！ 2026-03-16 8/400 2026-03-20 22:13 by luoyongfeng
[考研] 一志愿苏州大学材料求调剂，总分315（英一） +5 sbdksD 2026-03-19 5/250 2026-03-20 22:10 by luoyongfeng
[考研] 一志愿华中农业071010，总分320求调剂 +3 困困困困坤坤 2026-03-20 3/150 2026-03-20 20:38 by 学员8dgXkO
[考研] 一志愿 南京航空航天大学大学 ，080500材料科学与工程学硕 +5 @taotao 2026-03-20 5/250 2026-03-20 20:16 by JourneyLucky
[考研] 353求调剂 +3 拉钩不许变 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:56 by JourneyLucky
[考研] 281求调剂（0805） +14 烟汐忆海 2026-03-16 25/1250 2026-03-20 15:47 by yuncha
[考研] 081700化工学硕调剂 +3 【1】 2026-03-16 3/150 2026-03-19 23:40 by edmund7
[考研] 290求调剂 +3 p asserby. 2026-03-15 4/200 2026-03-17 16:35 by wangkm
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭