24小时热门版块排行榜    

查看: 2940  |  回复: 13
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

xdfy0301

新虫 (初入文坛)

[求助] 定点突变蛋白质不表达 已有1人参与

近期,做了几个点的定点突变,突变点是通过软件模拟得到的。通过突变,转化发酵,结果突变体没有酶活。突变体DNA测序表明突变正确,没有移码。但未能找到不表达的原因,向各位求助,指点一下何种原因导致不表达,谢谢。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xdfy0301

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by w_goodluck at 2013-12-05 20:14:03
楼主!我和你遇到是同样的问题!我推测应该是没有表达!
理由如下:
我用pET28a连接了一个目的基因(野生型),然后去做蛋白表达,SDSPAGE显示表达强度很高(条带很明显)。
然后我自己设计引物做了一轮定点突变 ...

你是针对其什么特性做的突变
8楼2013-12-06 11:05:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答

zh10246

铁杆木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-11-23 01:23:52
xdfy0301: 金币+2 2013-11-24 20:09:55
定点突变蛋白质不表达和结果突变体没有酶活不是一回事吧,你的蛋白是否表达呢,做个western看看
2楼2013-11-22 20:40:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xdfy0301

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by zh10246 at 2013-11-22 20:40:22
定点突变蛋白质不表达和结果突变体没有酶活不是一回事吧,你的蛋白是否表达呢,做个western看看

跑过SDS变性电泳,没有目的条带(正常目的条带很粗)因此,推测为没有表达
3楼2013-11-23 16:31:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

南子枫

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
xdfy0301: 金币+1 2013-11-24 20:10:03
难道是你突变的位点对表达有重要作用?
RT-PCR看看有没有转录活性如何?
4楼2013-11-23 19:31:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0856材料与化工,270求调剂 +6 YXCT 2026-03-01 6/300 2026-03-01 23:21 by 向上的胖东
[考研] 0856调剂 +5 刘梦微 2026-02-28 5/250 2026-03-01 22:30 by wang_dand
[考研] 275求调剂 +3 明远求学 2026-03-01 3/150 2026-03-01 22:29 by 刘兵
[考研] 一志愿郑大材料学硕298分,求调剂 +3 wsl111 2026-03-01 3/150 2026-03-01 21:38 by ms629
[考研] 0805总分292,求调剂 +7 幻想之殇 2026-03-01 7/350 2026-03-01 21:22 by 公瑾逍遥
[考研] 高分子化学与物理调剂 +6 好好好1233 2026-02-28 12/600 2026-03-01 19:48 by 好好好1233
[考研] 306分材料调剂 +4 chuanzhu川烛 2026-03-01 5/250 2026-03-01 19:48 by 无际的草原
[考研] 材料学硕318求调剂 +9 February_Feb 2026-03-01 11/550 2026-03-01 19:47 by 无懈可击111
[考研] 298求调剂 +6 axyz3 2026-02-28 6/300 2026-03-01 19:00 by 18137688336
[考研] 272求调剂 +6 材紫有化 2026-02-28 6/300 2026-03-01 18:58 by 18137688336
[考研] 295求调剂 +7 19171856320 2026-02-28 7/350 2026-03-01 18:54 by 18137688336
[考研] 0857调剂 +3 一ll半 2026-02-28 3/150 2026-03-01 18:32 by 热情沙漠
[考博] 26申博 +4 想申博! 2026-02-26 6/300 2026-03-01 17:32 by 想申博!
[考研] 321求调剂一志愿东北林业大学材料与化工英二数二 +4 虫虫虫虫虫7 2026-03-01 7/350 2026-03-01 16:52 by caszguilin
[考研] 材料工程274求调剂 +3 Lilithan 2026-03-01 3/150 2026-03-01 14:58 by ms629
[考研] 295复试调剂 +3 简木ChuFront 2026-03-01 3/150 2026-03-01 14:27 by zzxw520th
[考研] 寻找调剂 +4 LYidhsjabdj 2026-02-28 4/200 2026-03-01 10:56 by sunny81
[论文投稿] Optics letters投稿被拒求助 30+3 luckyry 2026-02-26 4/200 2026-03-01 09:06 by babero
[考研] 304求调剂 +3 52hz~~ 2026-02-28 5/250 2026-03-01 00:00 by 52hz~~
[高分子] 求环氧树脂研发1名 +3 孙xc 2026-02-25 11/550 2026-02-28 16:57 by ichall
信息提示
请填处理意见