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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 定点突变蛋白质不表达
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xdfy0301

新虫 (初入文坛)

[求助] 定点突变蛋白质不表达 已有1人参与

近期，做了几个点的定点突变，突变点是通过软件模拟得到的。通过突变，转化发酵，结果突变体没有酶活。突变体DNA测序表明突变正确，没有移码。但未能找到不表达的原因，向各位求助，指点一下何种原因导致不表达，谢谢。
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1楼 2013-11-22 20:15:01
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南子枫

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xdfy0301: 金币+1 2013-11-24 20:10:03
难道是你突变的位点对表达有重要作用？
RT-PCR看看有没有转录活性如何？
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4楼2013-11-23 19:31:00
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zh10246

铁杆木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-23 01:23:52
xdfy0301: 金币+2 2013-11-24 20:09:55
定点突变蛋白质不表达和结果突变体没有酶活不是一回事吧，你的蛋白是否表达呢，做个western看看
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2楼2013-11-22 20:40:22
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xdfy0301

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zh10246 at 2013-11-22 20:40:22
定点突变蛋白质不表达和结果突变体没有酶活不是一回事吧，你的蛋白是否表达呢，做个western看看

跑过SDS变性电泳，没有目的条带（正常目的条带很粗）因此，推测为没有表达
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3楼2013-11-23 16:31:26
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w_goodluck

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

楼主！我和你遇到是同样的问题！我推测应该是没有表达！
理由如下：
我用pET28a连接了一个目的基因（野生型），然后去做蛋白表达，SDSPAGE显示表达强度很高（条带很明显）。
然后我自己设计引物做了一轮定点突变，测序结果正确，同样去做蛋白表达，但是SDSPAGE就没有对照条带。
我推测的结果是没有表达，但是没有表达的原因说不清楚，感觉特别奇怪。
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5楼2013-12-05 20:14:03
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查看全部 14 个回答
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