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yakamoz294

新虫 (初入文坛)

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楼主我现在遇到了像你一样的问题，请问你解决了吗？是怎么解决的呢

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11楼2014-04-14 08:58:47

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woolley

新虫 (初入文坛)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
xdfy0301: 金币+4 2014-04-27 23:26:30

分析原因其实是个很麻烦的事情
像你的这种情况，比较可能的是
1.你的蛋白表达量低了，被内源条带遮盖，你可以尝试纯化一下看看，或者按楼上的建议跑一下western
2.你的蛋白突变后导致折叠问题，比如折叠出错或者变慢，导致疏水区暴露，或者在折叠某一时段暴露，然后被内源的蛋白酶系统降解
3.你突变后改变了mRNA的二级结构或稳定性，导致核糖体结合mRNA困难，或者mRNA快速降解。针对这种情况，你可以用同义密码子替换一下突变位点（或附近）的碱基，看看有没有效果
小概率的原因
4. 你突变后的位点是内源蛋白酶的识别位点
5. 如果你使用的是试剂盒进行突变（过程中复制了整个质粒），那么运气不好的话，在转录区域，RBS区域等发生突变，导致转录困难。

建议你用同义密码子突变替换一下现有的突变，如果还是不表达的，换一下突变位点的氨基酸类型
如果更换密码子有效果，问题可能在mRNA方面
如果更换氨基酸残基类型有效果，那么问题可能在折叠或构象方面

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12楼2014-04-14 11:14:42

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