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汕头大学海洋科学接受调剂
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xdfy0301

新虫 (初入文坛)

[求助] 定点突变蛋白质不表达 已有1人参与

近期,做了几个点的定点突变,突变点是通过软件模拟得到的。通过突变,转化发酵,结果突变体没有酶活。突变体DNA测序表明突变正确,没有移码。但未能找到不表达的原因,向各位求助,指点一下何种原因导致不表达,谢谢。
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w_goodluck

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

还有一种可能,就是这种突变酶(突变蛋白)可能严重的改变了空间结构,导致结构不稳定,在表达的时候被快速降解了(就是半衰期可能特别短)。
6楼2013-12-05 20:19:14
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查看全部 14 个回答

zh10246

铁杆木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-11-23 01:23:52
xdfy0301: 金币+2 2013-11-24 20:09:55
定点突变蛋白质不表达和结果突变体没有酶活不是一回事吧,你的蛋白是否表达呢,做个western看看
2楼2013-11-22 20:40:22
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xdfy0301

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by zh10246 at 2013-11-22 20:40:22
定点突变蛋白质不表达和结果突变体没有酶活不是一回事吧,你的蛋白是否表达呢,做个western看看

跑过SDS变性电泳,没有目的条带(正常目的条带很粗)因此,推测为没有表达
3楼2013-11-23 16:31:26
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南子枫

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
xdfy0301: 金币+1 2013-11-24 20:10:03
难道是你突变的位点对表达有重要作用?
RT-PCR看看有没有转录活性如何?
4楼2013-11-23 19:31:00
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