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不离不弃1215

铜虫 (小有名气)

[求助] 荧光定量PCR扩增曲线怎么成这样了呢?为什么? 已有5人参与

各位大神,帮帮忙呀!小妹我是荧光定量PCR的初学者,实验室有没有一个人做过荧光定量PCR 实验,现在老师把这个新东西给我了,要我建立这个体系,一切靠自己,慢慢的摸出点门道了,可是现在却出现这个问题,真的是纠结了两个月了还是没办法,现在你们是我最后的希望了。别的不多说了,大家看图吧,我用的仪器是ABIA的STEP ONE ,探针法做,结果发现曲线没有对数期,直接的一条线性曲线就出来了,而且看不到平台期,这是为什么呀?天呐,我都快被这个折磨疯了
荧光定量PCR扩增曲线怎么成这样了呢?为什么?
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wjswj

木虫 (正式写手)

小木虫领金币专业户

【答案】应助回帖


kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-01-07 08:46:10
循环数不够,模板太少,最大的可能是循环数不够,才30个……,设到45个图就好看了
金币是赌出来的
8楼2013-11-22 11:30:59
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普通回帖

yangpanfei

禁虫 (正式写手)


感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-11-18 11:02:07
本帖内容被屏蔽

2楼2013-11-18 08:50:51
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love_st

金虫 (著名写手)


【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-11-18 11:02:11
你这个是多重的还是单重,看起来好像是双重的,你把体系浓度发出来,看看
3楼2013-11-18 08:58:17
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lzliang87

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-11-22 13:00:46
你是用探针法做的QPCR,出现这种情况很正常的,几年前我刚刚开始做QPCR的时候这种情况也出现过,最后完美解决,呵呵。几年来一直做QPCR积累了不少经验,想详细了解的话q聊吧,比较方便,913668017
4楼2013-11-18 17:38:04
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不离不弃1215

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by lzliang87 at 2013-11-18 17:38:04
你是用探针法做的QPCR,出现这种情况很正常的,几年前我刚刚开始做QPCR的时候这种情况也出现过,最后完美解决,呵呵。几年来一直做QPCR积累了不少经验,想详细了解的话q聊吧,比较方便,913668017

濂藉憖锛屾槑澶╁姞浣燪Q,澶劅璋簡锛?

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
5楼2013-11-19 23:48:51
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不离不弃1215

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by yangpanfei at 2013-11-18 08:50:51
可能是模板浓度太低了,都没有达到阈值的,刚开始要做不同浓度梯度的,摸一下模板浓度条件

我问了个做过定量的博士,他怀疑也是这个问题,现在我先验证下是不是这问题,非常感谢!
6楼2013-11-22 11:17:10
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不离不弃1215

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by love_st at 2013-11-18 08:58:17
你这个是多重的还是单重,看起来好像是双重的,你把体系浓度发出来,看看

单重的,什么是体系浓度呀?我用质粒做的结果也差不多!我不知道实验室用的东洋纺的Taq  Mix 是不是不太好用,实验室每次换Taq  Mix就要换体系和程序,我发现以前的Taq  Mix的没有这个问题!不知道Taq  Mix对结果的影响大不大?
7楼2013-11-22 11:29:05
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love_st

金虫 (著名写手)


引用回帖:
7楼: Originally posted by 不离不弃1215 at 2013-11-22 11:29:05
单重的,什么是体系浓度呀?我用质粒做的结果也差不多!我不知道实验室用的东洋纺的Taq  Mix 是不是不太好用,实验室每次换Taq  Mix就要换体系和程序,我发现以前的Taq  Mix的没有这个问题!不知道Taq  Mix对结果的 ...

看你引物探针dntps 镁离子的终浓度下
9楼2013-11-22 11:36:58
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不离不弃1215

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by love_st at 2013-11-22 11:36:58
看你引物探针dntps 镁离子的终浓度下...

我买的是事前已经配好的Taq mix,全部都配好了,这个没办法改变的额
10楼2013-11-23 14:28:20
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