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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 荧光定量PCR扩增曲线怎么成这样了呢？为什么?
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不离不弃1215

铜虫 (小有名气)

[求助] 荧光定量PCR扩增曲线怎么成这样了呢？为什么? 已有5人参与

各位大神，帮帮忙呀！小妹我是荧光定量PCR的初学者，实验室有没有一个人做过荧光定量PCR 实验，现在老师把这个新东西给我了，要我建立这个体系，一切靠自己，慢慢的摸出点门道了，可是现在却出现这个问题，真的是纠结了两个月了还是没办法，现在你们是我最后的希望了。别的不多说了，大家看图吧，我用的仪器是ABIA的STEP ONE ，探针法做，结果发现曲线没有对数期，直接的一条线性曲线就出来了，而且看不到平台期，这是为什么呀？天呐，我都快被这个折磨疯了
荧光定量PCR扩增曲线怎么成这样了呢？为什么?
16s.jpg
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1楼 2013-11-17 20:12:11
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

wjswj

木虫 (正式写手)

小木虫领金币专业户

【答案】应助回帖

★
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-01-07 08:46:10
循环数不够，模板太少，最大的可能是循环数不够，才30个……，设到45个图就好看了
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金币是赌出来的
8楼2013-11-22 11:30:59
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普通回帖

yangpanfei

禁虫 (正式写手)
★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-11-18 11:02:07
本帖内容被屏蔽
2楼2013-11-18 08:50:51
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love_st

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-11-18 11:02:11
你这个是多重的还是单重，看起来好像是双重的，你把体系浓度发出来，看看
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3楼2013-11-18 08:58:17
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lzliang87

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-22 13:00:46
你是用探针法做的QPCR，出现这种情况很正常的，几年前我刚刚开始做QPCR的时候这种情况也出现过，最后完美解决，呵呵。几年来一直做QPCR积累了不少经验，想详细了解的话q聊吧，比较方便，913668017
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4楼2013-11-18 17:38:04
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不离不弃1215

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by lzliang87 at 2013-11-18 17:38:04
你是用探针法做的QPCR，出现这种情况很正常的，几年前我刚刚开始做QPCR的时候这种情况也出现过，最后完美解决，呵呵。几年来一直做QPCR积累了不少经验，想详细了解的话q聊吧，比较方便，913668017

濂藉憖锛屾槑澶╁姞浣燪Q,澶劅璋簡锛?

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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5楼2013-11-19 23:48:51
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不离不弃1215

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yangpanfei at 2013-11-18 08:50:51
可能是模板浓度太低了，都没有达到阈值的，刚开始要做不同浓度梯度的，摸一下模板浓度条件

我问了个做过定量的博士，他怀疑也是这个问题，现在我先验证下是不是这问题，非常感谢！
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6楼2013-11-22 11:17:10
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不离不弃1215

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by love_st at 2013-11-18 08:58:17
你这个是多重的还是单重，看起来好像是双重的，你把体系浓度发出来，看看

单重的，什么是体系浓度呀？我用质粒做的结果也差不多！我不知道实验室用的东洋纺的Taq  Mix 是不是不太好用，实验室每次换Taq  Mix就要换体系和程序，我发现以前的Taq  Mix的没有这个问题！不知道Taq  Mix对结果的影响大不大？
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7楼2013-11-22 11:29:05
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love_st

金虫 (著名写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 不离不弃1215 at 2013-11-22 11:29:05
单重的，什么是体系浓度呀？我用质粒做的结果也差不多！我不知道实验室用的东洋纺的Taq  Mix 是不是不太好用，实验室每次换Taq  Mix就要换体系和程序，我发现以前的Taq  Mix的没有这个问题！不知道Taq  Mix对结果的 ...

看你引物探针dntps 镁离子的终浓度下
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9楼2013-11-22 11:36:58
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不离不弃1215

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by love_st at 2013-11-22 11:36:58
看你引物探针dntps 镁离子的终浓度下...

我买的是事前已经配好的Taq mix，全部都配好了，这个没办法改变的额
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10楼2013-11-23 14:28:20
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