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新虫 (初入文坛)

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专业: 食品科学基础

【答案】应助回帖

应该是模板浓度太低了

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11楼2013-12-16 19:40:43

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漩涡鸣人

新虫 (初入文坛)

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虫号: 1215674
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请问楼主最后怎么解决的？

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12楼2014-01-06 21:39:41

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2009wqg

新虫 (小有名气)

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专业: 免疫学研究新技术与新方法

【答案】应助回帖

如果你是做的单通道检测项目，那这个问题一般很好解决：
1、建议做完40个循环。
2、如果40个循环后曲线还是不呈“S”型，建议按荧光PCR通用体系自配试下（网上随便搜个荧光PCR通用体系，dNTP/buffer/Mg离子/酶都可以先采用TAKARA的试下，体系优化没有想象的那么重要）
3、如果以上2者还不行，往往只不过是表明你采用的引物探针效果不好，需要重新设计序列。（探针比较贵，轻易不换，建议你先多设计几对引物序列，然后再按通用体系扩下，对了模板就用质粒就行了——不清楚质粒用多大浓度，则把小量提取的质粒从原液做10倍、100倍、1000倍、10000倍、100000倍稀释就行了）实在换引物不行，再考虑重新设计探针和引物（甚至换扩增区间）。

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13楼2014-04-29 15:29:53

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