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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 荧光定量PCR扩增曲线怎么成这样了呢？为什么?
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biocolor

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

应该是模板浓度太低了
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11楼2013-12-16 19:40:43
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漩涡鸣人

新虫 (初入文坛)
请问楼主最后怎么解决的？
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12楼2014-01-06 21:39:41
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2009wqg

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

如果你是做的单通道检测项目，那这个问题一般很好解决：
1、建议做完40个循环。
2、如果40个循环后曲线还是不呈“S”型，建议按荧光PCR通用体系自配试下（网上随便搜个荧光PCR通用体系，dNTP/buffer/Mg离子/酶都可以先采用TAKARA的试下，体系优化没有想象的那么重要）
3、如果以上2者还不行，往往只不过是表明你采用的引物探针效果不好，需要重新设计序列。（探针比较贵，轻易不换，建议你先多设计几对引物序列，然后再按通用体系扩下，对了模板就用质粒就行了——不清楚质粒用多大浓度，则把小量提取的质粒从原液做10倍、100倍、1000倍、10000倍、100000倍稀释就行了）实在换引物不行，再考虑重新设计探针和引物（甚至换扩增区间）。
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13楼2014-04-29 15:29:53
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gengkan

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

主要还是循环数不够造成的吧，我们一般要做到45个呢
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14楼2015-04-24 10:31:25
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WHABnew

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我做定量也用的这台型号，但是方法可能不一样，首先看你的基因是不是本来表达丰度就很低，另外就是你的模板浓度，还有就是按照你用的试剂盒建议的循环数，希望对楼主有用。
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15楼2015-04-24 14:04:53
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wx26794

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

曲线没有指数期，直接进入线性期，PCR扩增效率较差，可能跟模板质量、酶的活性有关。
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16楼2015-06-01 17:04:26
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