| 查看: 8374 | 回复: 15 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[求助]
荧光定量PCR扩增曲线怎么成这样了呢？为什么? 已有5人参与
|
|||
各位大神，帮帮忙呀！小妹我是荧光定量PCR的初学者，实验室有没有一个人做过荧光定量PCR 实验，现在老师把这个新东西给我了，要我建立这个体系，一切靠自己，慢慢的摸出点门道了，可是现在却出现这个问题，真的是纠结了两个月了还是没办法，现在你们是我最后的希望了。别的不多说了，大家看图吧，我用的仪器是ABIA的STEP ONE ，探针法做，结果发现曲线没有对数期，直接的一条线性曲线就出来了，而且看不到平台期，这是为什么呀？天呐，我都快被这个折磨疯了 16s.jpg |
回复此楼» 猜你喜欢
富马酸贝达喹啉：二芳基喹啉类工具化合物的化学特征
已经有0人回复
-
BT投稿with editor状态快两周了，正常吗
已经有25人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有261人回复
-
Silevertinib（BDTX-1535）结构拆解：炔基双环片段为何成为合成瓶颈
已经有0人回复
-
RO4929097 解析：双苯并氮杂䓬骨架与 Notch 通路实验设计要点
已经有0人回复
-
分子量 1157 的 PROTAC 怎么配不析出：SGK3-PROTAC1 的溶解、分装与图谱复核
已经有0人回复
-
logP 6.1 的羧酸怎么配母液：GSK 650394 的溶解窗口与稀释顺序
已经有0人回复
-
从"水不溶"到 71 mg/mL：雷特格韦的 pH 依赖溶解与螯合色谱边界
已经有0人回复
-
133 Ų 的极性表面积，如何决定 TNG462 的母液配制与色谱条件
已经有0人回复
-
两个氟原子与一段氨基甲酸甲酯：BLU-5937 的母液配制与稳定性边界
已经有0人回复
-
司美那非（TPN171）：从嘧啶酮母核到工艺放大的结构、色谱与质控参数解析
已经有0人回复
【答案】应助回帖
|
如果你是做的单通道检测项目，那这个问题一般很好解决： 1、建议做完40个循环。 2、如果40个循环后曲线还是不呈“S”型，建议按荧光PCR通用体系自配试下（网上随便搜个荧光PCR通用体系，dNTP/buffer/Mg离子/酶都可以先采用TAKARA的试下，体系优化没有想象的那么重要） 3、如果以上2者还不行，往往只不过是表明你采用的引物探针效果不好，需要重新设计序列。（探针比较贵，轻易不换，建议你先多设计几对引物序列，然后再按通用体系扩下，对了模板就用质粒就行了——不清楚质粒用多大浓度，则把小量提取的质粒从原液做10倍、100倍、1000倍、10000倍、100000倍稀释就行了）实在换引物不行，再考虑重新设计探针和引物（甚至换扩增区间）。 |
13楼2014-04-29 15:29:53
yangpanfei
禁虫 (正式写手)
★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-11-18 11:02:07
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-11-18 11:02:07
|
本帖内容被屏蔽 |
2楼2013-11-18 08:50:51
3楼2013-11-18 08:58:17
4楼2013-11-18 17:38:04
10