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芥末橙子

新虫 (初入文坛)

[求助] Western Blot 转膜

转膜用的是湿转，70V，1h，转完膜后，膜胶粘一起了，粘的很严重，胶撕裂了，碎胶还在膜上，拿镊子慢慢扣下来的，这种情况是怎么回事？转的也不干净，胶上的marker还是很清晰
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1楼 2013-11-15 08:02:43
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youlinglyw

荣誉版主 (著名写手)

一匡天下

优秀版主

【答案】应助回帖

这个电压低了吧。干转用这个还差不多。
不过这个也取决于你的片段大小。
还有，看你这样子，似乎转膜液有问题

另外，marker在，说明你转膜基本上不成功。
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天行健
2楼2013-11-15 09:46:17
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youlinglyw

荣誉版主 (著名写手)

一匡天下

优秀版主
ps，回帖仅仅为讨论哈，欢迎楼下指正
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天行健
3楼2013-11-15 09:46:58
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芥末橙子

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by youlinglyw at 2013-11-15 09:46:17
这个电压低了吧。干转用这个还差不多。
不过这个也取决于你的片段大小。
还有，看你这样子，似乎转膜液有问题

另外，marker在，说明你转膜基本上不成功。

啊？转膜液的配方是
甘氨酸：14.4g
Tris:      3.03g
然后加800ml 水，再加200ml纯甲醇
转膜的电压以前也试过80v,1.5h 的，但是结果都差不多，我的目的蛋白是十几kd的，但是两个不同的转膜条件下，都能做出β-actin的
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4楼2013-11-15 12:49:23
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晴天1882

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

转膜不是应该恒流吗？我一般250毫安，2小时。
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人有绝交，才有至交！
5楼2013-11-15 13:55:27
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爵士小孩

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我也不知道你的怎么回事，我只能说说我的作法，我是湿转，大概要1L转膜液，电流300mA 2h，转膜过程中一定要保持转膜液的温度，利用冰块降温。你在试试，反正我每次都可以！
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我就是我！
6楼2013-11-15 15:24:54
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芥末橙子

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 爵士小孩 at 2013-11-15 15:24:54
我也不知道你的怎么回事，我只能说说我的作法，我是湿转，大概要1L转膜液，电流300mA 2h，转膜过程中一定要保持转膜液的温度，利用冰块降温。你在试试，反正我每次都可以！

恩 真心的谢谢~~~
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7楼2013-11-15 19:37:38
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