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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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yuren2009

木虫 (正式写手)


[交流] PCR引物问题

根据保守序列设计了一对引物,上下游GC含量都是28.6%,tm均为值50.2,长度均为21.请问这样GC含量低的引物适不适合来做PCR?
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Lovebirdshs

木虫 (小有名气)


★ ★ ★ ★
yuren2009: 金币+2 2013-11-10 21:15:58
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-11-10 23:01:14
PCR这种实验有时候很靠感觉的,PRIMER评分很高的引物扩增效果不一定理想,而有些引物分数比较低但扩增的却很好,这相信大家都经历过的,具体还是个最好试一下,反正合引物又用不了几个钱
4楼2013-11-10 19:57:38
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三蛰

铜虫 (小有名气)


★ ★ ★ ★ ★
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yuren2009: 金币+2 2013-11-10 21:15:52
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-11-10 23:01:07
GC值太低,导致tm值也较低,对目的dna的解链会有影响。
2楼2013-11-10 18:40:26
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joan198108

铁杆木虫 (正式写手)


★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
yuren2009: 金币+2 2013-11-11 09:47:50
我经常自己用眼睛瞅,看出后再用软件检测一下。引物各项指标好的不一定能扩增成功,以实际效果为准
5楼2013-11-11 09:14:45
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笨熊zhou

木虫 (小有名气)


★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
yuren2009: 金币+2 2013-11-11 16:32:13
一般不能但看GC含量,而要由引物的Tm值来综合判断,一般Tm值在2C以内。而Tm值主要由两个因素控制:GC含量和碱基数目。只要GC含量在40-60%都是可以接受的。12%只要Tm值不超过2C,应该是可以的。但是,您为何要选择相差这么大的引物?可以考虑其它引物啊?除非您要特定区域的,比如要包含起始密码子?
6楼2013-11-11 14:59:35
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