应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » His-tag蛋白纯化柱子洗脱液中除去咪唑的办法
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
91/1返回列表
查看: 7276  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

vpz2007

木虫 (小有名气)

[求助] His-tag蛋白纯化柱子洗脱液中除去咪唑的办法

请问蛋白溶解在250mM咪唑、50mM磷酸二氢钠、300mM氯化钠中的蛋白洗脱液怎样才能除盐将蛋白改溶解在PBS中呢？
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

蛋白质生物学实验经验

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
可以接受失败，但不能失去再次站起来的勇气
1楼 2013-11-08 15:44:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
vpz2007: 金币+2, ★有帮助 2013-11-08 19:25:24
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-08 19:25:56
vpz2007: 金币+2, ★★★★★最佳答案 2013-11-09 00:16:48
（1）透析
（2）浓缩样品后上分子筛柱，然后用你想要的溶液洗脱
赞一下 回复此楼
行至水穷处，坐看云起时
2楼2013-11-08 16:27:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangpeng227

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励交流！ 2013-11-08 19:26:02
vpz2007: 金币+1, ★有帮助 2013-11-08 19:28:41
可以试试超滤，比透析快
赞一下 回复此楼
3楼2013-11-08 16:30:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

vpz2007

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by pennchem at 2013-11-08 16:27:13
（1）透析
（2）浓缩样品后上分子筛柱，然后用你想要的溶液洗脱

透析的话用什么缓冲液透析呢？透析袋浸泡在哪里？我以前用PBS透析有蛋白在透析袋里面析出，好像是咪唑从透析袋出去之后PH变酸了。分子筛柱的话不是应该大蛋白先出来吗？是除盐啊，怎么换缓冲液呢？
赞一下 回复此楼
可以接受失败，但不能失去再次站起来的勇气
4楼2013-11-08 19:25:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

vpz2007

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by wangpeng227 at 2013-11-08 16:30:15
可以试试超滤，比透析快

请问超滤的话咪唑和其他无机盐都是等体积滤出吗？那最后咪唑浓度也没有降低啊
赞一下 回复此楼
可以接受失败，但不能失去再次站起来的勇气
5楼2013-11-08 19:28:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pennchem

专家顾问 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by vpz2007 at 2013-11-08 19:25:12
透析的话用什么缓冲液透析呢？透析袋浸泡在哪里？我以前用PBS透析有蛋白在透析袋里面析出，好像是咪唑从透析袋出去之后PH变酸了。分子筛柱的话不是应该大蛋白先出来吗？是除盐啊，怎么换缓冲液呢？...

稳妥的透析是逐步降低咪唑和盐浓度，到你希望的浓度为止

分子筛的小分子(水，盐，有机小分子，这些跟蛋白不是比大小的关系，不是一个数量级的)肯定先跑出来，如果够浓缩的话，换buffer一步到位，而且还可以进一步纯化蛋白
赞一下(1人) 回复此楼
行至水穷处，坐看云起时
6楼2013-11-08 21:14:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

vpz2007

木虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by pennchem at 2013-11-08 21:14:37
稳妥的透析是逐步降低咪唑和盐浓度，到你希望的浓度为止

分子筛的小分子(水，盐，有机小分子，这些跟蛋白不是比大小的关系，不是一个数量级的)肯定先跑出来，如果够浓缩的话，换buffer一步到位，而且还可以进一 ...

透析是说将250mM咪唑、50mM磷酸二氢钠、300mM氯化钠配成的洗脱液逐级降低当做透析袋外面的溶液吗？这样就可以？还是只降低咪唑浓度？

呃，弱弱的问一句，分子筛和除盐小柱一样吗？我们实验室以前有人用Thermo的Zeba脱盐离心柱除盐，那个可以吗，请问有用分子筛更换缓冲液的实验步骤吗？
赞一下 回复此楼
可以接受失败，但不能失去再次站起来的勇气
7楼2013-11-09 00:16:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangpeng227

木虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by vpz2007 at 2013-11-08 19:28:16
请问超滤的话咪唑和其他无机盐都是等体积滤出吗？那最后咪唑浓度也没有降低啊...

可以加上你要换的buffer，几次之后，buffer就被置换了，大分子的蛋白是被截留的，损失也有，但不太大。
赞一下 回复此楼
8楼2013-11-09 12:26:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

凌波丽

专家顾问 (知名作家)
引用回帖:
7楼: Originally posted by vpz2007 at 2013-11-09 00:16:00
透析是说将250mM咪唑、50mM磷酸二氢钠、300mM氯化钠配成的洗脱液逐级降低当做透析袋外面的溶液吗？这样就可以？还是只降低咪唑浓度？

呃，弱弱的问一句，分子筛和除盐小柱一样吗？我们实验室以前有人用Thermo的 ...

可以使用透析、超滤先除去不要的小分子，再加入需要的小分子，包括新的缓冲溶液，也可以使用分子筛更换缓冲液。

使用使用分子筛更换缓冲液的具体试验方法，请见：
吕宪禹 主编，蛋白质纯化实验方案与应用        ，化学工业出版社，2010,39-41，全书下载：http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=6307126&fpage=1&target=blank
赞一下 回复此楼
9楼2014-07-17 00:03:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 vpz2007 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 调剂310 +4 温柔的晚安 2026-03-25 5/250 2026-03-28 13:15 by 唐沐儿
[考研] 0703一志愿9，初试成绩：338，四六级已过，有科研经历，求调剂！ +4 Zuhui0306 2026-03-25 4/200 2026-03-28 13:07 by 唐沐儿
[考研] 材料与化工（0856）304求B区调剂 +8 邱gl 2026-03-27 8/400 2026-03-28 12:42 by 唐沐儿
[考研] 085701环境工程，267求调剂 +16 minht 2026-03-26 16/800 2026-03-28 12:16 by zllcz
[考研] 材料277求调剂 +7 min3 2026-03-24 7/350 2026-03-28 11:39 by xuxiang
[考研] 一志愿南京航空航天大学材料学硕求调剂 +3 @taotao 2026-03-28 3/150 2026-03-28 10:26 by JourneyLucky
[考研] 086502化学工程342求调剂 +6 阿姨复古不过 2026-03-27 6/300 2026-03-28 07:06 by wangy0907
[考研] 求调剂推荐 材料 304 +15 荷包蛋hyj 2026-03-26 15/750 2026-03-28 04:13 by fmesaito
[考研] 265求调剂11408 +3 刘小鹿lu 2026-03-27 3/150 2026-03-27 20:53 by nihaoar
[考研] 求调剂 +3 刘柯@ 2026-03-24 4/200 2026-03-27 11:28 by shangxh
[考研] 材料调剂 5+4 想要一壶桃花水 2026-03-25 10/500 2026-03-26 19:56 by 不吃魚的貓
[考研] 289求调剂 +17 硕星赴 2026-03-23 17/850 2026-03-26 16:18 by 不吃魚的貓
[考研] 寻找调剂 +5 倔强芒? 2026-03-21 8/400 2026-03-26 13:25 by 0906ljy
[考研] 289材料与化工（085600）B区求调剂 +4 这么名字咋样 2026-03-22 5/250 2026-03-25 08:20 by mx.yue
[考研] 305分求调剂（食品工程） +5 Sxy112 2026-03-21 7/350 2026-03-24 12:27 by 544594351
[考博] 26申博自荐 +3 whh869393 2026-03-24 3/150 2026-03-24 09:55 by 21018060
[考研] 361求调剂 +3 Glack 2026-03-22 3/150 2026-03-23 22:03 by fuyu_
[考研] 接收2026硕士调剂(学硕+专硕) +4 allen-yin 2026-03-23 6/300 2026-03-23 15:04 by 汪！？！
[考研] 293求调剂 +3 涛涛Wjt 2026-03-22 5/250 2026-03-22 22:21 by jiangpengfei
[考研] 求调剂 +5 Zhangbod 2026-03-21 7/350 2026-03-22 13:13 by Zhangbod
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭