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vpz2007

木虫 (小有名气)

[求助] His-tag蛋白纯化柱子洗脱液中除去咪唑的办法

请问蛋白溶解在250mM咪唑、50mM磷酸二氢钠、300mM氯化钠中的蛋白洗脱液怎样才能除盐将蛋白改溶解在PBS中呢？
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可以接受失败，但不能失去再次站起来的勇气
1楼 2013-11-08 15:44:27
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vpz2007

木虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by pennchem at 2013-11-08 21:14:37
稳妥的透析是逐步降低咪唑和盐浓度，到你希望的浓度为止

分子筛的小分子(水，盐，有机小分子，这些跟蛋白不是比大小的关系，不是一个数量级的)肯定先跑出来，如果够浓缩的话，换buffer一步到位，而且还可以进一 ...

透析是说将250mM咪唑、50mM磷酸二氢钠、300mM氯化钠配成的洗脱液逐级降低当做透析袋外面的溶液吗？这样就可以？还是只降低咪唑浓度？

呃，弱弱的问一句，分子筛和除盐小柱一样吗？我们实验室以前有人用Thermo的Zeba脱盐离心柱除盐，那个可以吗，请问有用分子筛更换缓冲液的实验步骤吗？
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可以接受失败，但不能失去再次站起来的勇气
7楼2013-11-09 00:16:00
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
vpz2007: 金币+2, ★有帮助 2013-11-08 19:25:24
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-08 19:25:56
vpz2007: 金币+2, ★★★★★最佳答案 2013-11-09 00:16:48
（1）透析
（2）浓缩样品后上分子筛柱，然后用你想要的溶液洗脱
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行至水穷处，坐看云起时
2楼2013-11-08 16:27:13
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wangpeng227

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励交流！ 2013-11-08 19:26:02
vpz2007: 金币+1, ★有帮助 2013-11-08 19:28:41
可以试试超滤，比透析快
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3楼2013-11-08 16:30:15
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vpz2007

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by pennchem at 2013-11-08 16:27:13
（1）透析
（2）浓缩样品后上分子筛柱，然后用你想要的溶液洗脱

透析的话用什么缓冲液透析呢？透析袋浸泡在哪里？我以前用PBS透析有蛋白在透析袋里面析出，好像是咪唑从透析袋出去之后PH变酸了。分子筛柱的话不是应该大蛋白先出来吗？是除盐啊，怎么换缓冲液呢？
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可以接受失败，但不能失去再次站起来的勇气
4楼2013-11-08 19:25:12
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