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然-然

铜虫 (初入文坛)

[求助] 求助PCR扩增试验遇到的问题?

引物:27F:AGAGTTTGATCCTGGCTCAG
       1492r:TACGGYTACCTTGTTACGACTT
反应体系:94℃ 2min(94℃ 1min,60℃ 1min,72℃ 90s)30循环,72℃ 10min,保温4℃。
大板的那个是一次电泳图片,小的是二次PCR电泳图片,我想送出去测序,总说我的样品浓度太低,请求各位大侠的指导。
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然-然

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 562190113 at 2013-11-08 00:51:03
你可以把DNA重新沉淀啊,这样DNA就还原了。加dd水溶解的时候可以少加点dd水。这样DNA浓度就增大了。扩增效果应该明显一点。还有就是配体系的时候用枪加的量一定要够。
...

你可以说的详细点吗
8楼2013-11-08 14:33:41
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查看全部 13 个回答

Hazel张健

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+3, 鼓励发帖积极交流。 2013-11-08 08:25:20
然-然: 金币+3 2013-11-18 15:23:22
你的marker是?!貌似你的PCR产物不是单一条带哦~对图片再多给点信息~
2楼2013-11-07 21:32:32
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然-然

铜虫 (初入文坛)

非常感谢你的回答,我的这两个图片都没有mark,都是样品的,我以前做过有mark的,我现在做是想送出去测序,但是条带越来越暗了,送出去的结果回来说样品浓度太低,共送出去13个样,出来了6个,其余的7个都没出来,反应体系25μl,上游引物(10μM):0.5μl,下游引物(10μM):0.5μl,无菌水13μl,预混液10μl
3楼2013-11-07 21:46:37
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562190113

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-11-08 10:47:06
然-然: 金币+2, 有帮助 2013-11-12 10:45:17
你可以把DNA重新沉淀啊,这样DNA就还原了。加dd水溶解的时候可以少加点dd水。这样DNA浓度就增大了。扩增效果应该明显一点。还有就是配体系的时候用枪加的量一定要够。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
4楼2013-11-08 00:51:03
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