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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助PCR扩增试验遇到的问题？
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然-然

铜虫 (初入文坛)

[求助] 求助PCR扩增试验遇到的问题？

引物：27F:AGAGTTTGATCCTGGCTCAG
       1492r:TACGGYTACCTTGTTACGACTT
反应体系：94℃ 2min（94℃ 1min，60℃ 1min，72℃ 90s）30循环，72℃ 10min，保温4℃。
大板的那个是一次电泳图片，小的是二次PCR电泳图片，我想送出去测序，总说我的样品浓度太低，请求各位大侠的指导。
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    • 2013-11-07 20:55:55, 10.17 M
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    • 2013-11-07 20:57:57, 12.87 M

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1楼 2013-11-07 21:00:13
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562190113

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
myprayer: 金币+1, 鼓励发帖积极交流。 2013-11-08 08:25:40
你的俩个引物都是细菌通用引物。应该是做微生物的吧。我本科的实验就用这两个引物。其实，你也可以用PA PB试试的。虽然它是放线菌的引物。还有我想问你是塔里木大学张利莉院长的学生麽？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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5楼2013-11-08 00:57:19
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Hazel张健

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+3, 鼓励发帖积极交流。 2013-11-08 08:25:20
然-然: 金币+3 2013-11-18 15:23:22
你的marker是？！貌似你的PCR产物不是单一条带哦~对图片再多给点信息~
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2楼2013-11-07 21:32:32
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然-然

铜虫 (初入文坛)
非常感谢你的回答，我的这两个图片都没有mark，都是样品的，我以前做过有mark的，我现在做是想送出去测序，但是条带越来越暗了，送出去的结果回来说样品浓度太低，共送出去13个样，出来了6个，其余的7个都没出来，反应体系25μl，上游引物（10μM)：0.5μl，下游引物（10μM)：0.5μl，无菌水13μl，预混液10μl
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3楼2013-11-07 21:46:37
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562190113

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-08 10:47:06
然-然: 金币+2, ★有帮助 2013-11-12 10:45:17
你可以把DNA重新沉淀啊，这样DNA就还原了。加dd水溶解的时候可以少加点dd水。这样DNA浓度就增大了。扩增效果应该明显一点。还有就是配体系的时候用枪加的量一定要够。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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4楼2013-11-08 00:51:03
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