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凝胶层析蛋白洗不下来
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各位大神： 我而今算是遇到了最诡异的事了。我用的是Sephadex G-75，手工分多次装柱（没有装柱器），肉眼看来柱子装的比较均匀。之前用蓝色葡聚糖跑了一下，能跑出来。但不论是我的蛋白样品或者是BSA溶液，核酸蛋白检测仪均检测不到蛋白质存在。 详细情况是这样的： 1）第一次装柱，蓝色葡聚糖ok，将我的蛋白液【注】与蓝色葡聚糖混合后再次上样，结果在几乎和蓝色葡聚糖出来的同时，检测仪发现有大量蛋白正在洗出来了。但一个蛋白峰过后，再也没有检测到有任何蛋白洗出。 2）用缓冲液冲洗柱床过夜，次日，加入~1%床体积的BSA溶液，发现一个蛋白吸收峰都没有了。 【注】：溶解目的蛋白液的缓冲液是柱缓冲液的5×形式，上样前已经10000g离心去除了上样中的沉淀。柱是25× Φ2.5cm的，流速约1ml/min(恒压)。 这个会的人应该是很简单的，但小弟这边还是自己摸索，希望大家给予点指导。不胜感激 |
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7楼2013-11-01 21:52:56
冼亮淀粉酶
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