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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 梯度洗脱-离子交换与疏水层析
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lizhijiang

木虫 (著名写手)

[交流] 梯度洗脱-离子交换与疏水层析

离子交换与疏水层析都选用梯度洗脱时，选用简易梯度洗脱仪，假设：离子交换选用0-1M NaCl，增加离子强度而降低蛋白与介质电荷，从而实现梯度洗脱；反之，疏水层析选用1-0 M (NH4)2SO4 递减梯度洗脱，降低离子强度而降低蛋白与介质疏水作用，从而实现梯度洗脱。
不知这样理解对否？在梯度洗脱仪上，这两种方法只是简单地高盐溶液位置不同，即离子交换高盐溶液不在带磁力搅拌的beaker中。而疏水层析高盐溶液在搅拌的beaker中。请高人指教，不知这样做对否！！谢谢

下面示意图对吗？[ Last edited by lizhijiang on 2012-10-9 at 10:28 ]
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1楼 2012-10-08 10:50:23
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dshlove

木虫 (正式写手)
★ ★
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lizhijiang: 金币+1 2012-10-08 18:14:57
离子交换最好的洗脱液是高盐，而疏水最强的洗脱液应该是水。
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2楼2012-10-08 11:17:09
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lizhijiang

木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by dshlove at 2012-10-08 11:17:09
离子交换最好的洗脱液是高盐，而疏水最强的洗脱液应该是水。

楼上太绝对了吧？离子交换的盐洗脱浓度对具体蛋白质是不同的，需要优化！疏水性比水强的似乎也有很多！我本意不是探讨这个问题，谢谢回复！
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3楼2012-10-08 18:14:52
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青豆同学

铜虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
lizhijiang: 金币+1 2012-10-08 18:20:00
理解是对的，就是别忘了先把树脂处理好
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4楼2012-10-08 18:17:59
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lizhijiang

木虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 青豆同学 at 2012-10-08 18:17:59
理解是对的，就是别忘了先把树脂处理好

谢谢。还有就是，做疏水柱时，样品中盐浓度与洗脱初始浓度是相同的。但还不是我的问题，望指教，谢谢！
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5楼2012-10-08 18:19:57
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青豆同学

铜虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by lizhijiang at 2012-10-08 18:19:57
谢谢。还有就是，做疏水柱时，样品中盐浓度与洗脱初始浓度是相同的。但还不是我的问题，望指教，谢谢！...

样品上柱子前，样品和柱子盐浓度要相同。是这个问题？
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6楼2012-10-08 18:23:17
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zxc6884

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
开始的Buffer都要一致
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7楼2012-10-08 19:20:01
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lizhijiang

木虫 (著名写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 青豆同学 at 2012-10-08 18:23:17
样品上柱子前，样品和柱子盐浓度要相同。是这个问题？...

如何梯度洗脱疏水层析？
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8楼2012-10-08 20:25:24
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青豆同学

铜虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
8楼: Originally posted by lizhijiang at 2012-10-08 20:25:24
如何梯度洗脱疏水层析？...

样品盐浓度1M，树脂盐浓度1M，样品上柱子，再用三倍柱子体积的1M盐洗柱子，洗脱是1~0M盐
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9楼2012-10-08 20:46:16
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青豆同学

铜虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
lizhijiang: 金币+1 2012-10-09 08:33:05
是机器操作吧？通常都是先走A，再走B，所以A是1M，B是0M
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10楼2012-10-08 20:49:11
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dshlove

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by lizhijiang at 2012-10-08 18:14:52
楼上太绝对了吧？离子交换的盐洗脱浓度对具体蛋白质是不同的，需要优化！疏水性比水强的似乎也有很多！我本意不是探讨这个问题，谢谢回复！...

你误解我的意思了。
我没有对所有蛋白都绝对化了，我只是阐述一下离子交换和疏水的最强洗脱条件罢了。
我只是肯定了你的理解罢了。
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11楼2012-10-09 10:38:26
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