| 查看: 1359 | 回复: 5 | |||
amq7392铁杆木虫 (著名写手)
|
[求助]
请教一下做疏水层析遇到的问题
|
|
我用Phenyl Sepharose 6 Fast Flow (high sub)纯化一个酶， 上样和平衡缓冲液为50 mM磷酸盐，pH7.0，1 M硫酸铵， 上样后依次用0.8、0.6、0.4、0.2、0 M硫酸铵、蒸馏水阶段式洗脱， 结果每个阶段都出一个峰，每个峰大小差不多，而且每个峰都有酶活，酶活也差不多（不含硫酸铵的buffer、蒸馏水洗脱峰稍大且尖锐，酶活稍高）。 似乎从0.8 M硫酸铵开始就有目标酶洗脱下来，但是又不能完全洗脱，直到用蒸馏水洗，目标酶才全部洗脱下来，而在此过程中目标酶和杂蛋白根本就没分开呀，仅仅在流穿峰当中去掉了一部分不结合的杂质。 问题总结：如果说蛋白和柱子结合的紧，为何在0.8M硫酸铵就有目标蛋白洗脱下来？如果说结合的松，为何0 M硫酸铵仍不能完全洗脱，要用蒸馏水才能完全洗脱？ 为什么在0.8——0M硫酸铵阶段洗脱过程中，每一步都有目标蛋白洗脱下来，而且在每个峰中酶活分布这么均匀？ |
回复此楼» 猜你喜欢
一志愿211，化学学硕，310分，本科重点双非，求调剂
已经有9人回复
-
一志愿211，化学学硕，310分，本科重点双非，求调剂
已经有17人回复
-
070300化学学硕311分求调剂
已经有15人回复
-
材料调剂
已经有13人回复
-
材料与化工专硕306分找合适调剂
已经有19人回复
-
化学工程调剂289
已经有19人回复
-
化工学硕 285求调剂
已经有22人回复
-
298求调剂
已经有6人回复
-
368化学求调剂
已经有3人回复
-
326求调剂
已经有6人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 请教一个吸附-解吸的问题
已经有4人回复
- 请教各位老师和同学，对于分离化合物层析柱的选择的依据是什么？
已经有10人回复
- 有机新鸟求教点板检测反应进程问题
已经有16人回复
- 请教大家几个层析吸附过程中缓冲液配置的问题？
已经有5人回复
- 怎么做微量反应啊
已经有3人回复
- 疏水柱分离蛋白
已经有5人回复
- 触变性相关问题
已经有8人回复
- 向大家请教一个关于硅的湿法腐蚀的相关问题。。
已经有4人回复
- 疏水参数的定义
已经有5人回复
- fluent使用之奇怪现象
已经有12人回复
- 请教关于MES buffer的问题
已经有3人回复
- 有关疏水层析的问题
已经有18人回复
- Q-Sepharose Fast Flow 纯化蛋白遇到的棘手问题
已经有11人回复
- 为什么有些蛋白质不适合采用疏水层析的原因
已经有5人回复
- 梯度洗脱-离子交换与疏水层析
已经有10人回复
- 关于机械专业考证的问题想请教一下大家。
已经有15人回复
- 做薄层层析，特别不稳定，换高效薄层层析板，效果会好点吗
已经有8人回复
- 疏水层析填料的选择
已经有4人回复
- 疏水层析蛋白洗不下来怎么办
已经有10人回复
- 离子交换层析（deae-纤维素）出峰差异很大（有图谱）
已经有26人回复
- 【求助】Mulliken charges 分析中遇到的一个问题
已经有10人回复
- 【求助】heck 反应中的一个问题
已经有19人回复
dshlove
木虫 (正式写手)
- BioEPI: 9
- 应助: 237 (大学生)
- 金币: 4764.7
- 散金: 20
- 红花: 10
- 帖子: 852
- 在线: 419.2小时
- 虫号: 1609389
- 注册: 2012-02-10
- 性别: GG
- 专业: 污染控制化学
2楼2012-12-07 14:26:34
冼亮淀粉酶
专家顾问 (知名作家)
生物大分子降解酶
-
专家经验: +248 - BioEPI: 73
- 应助: 257 (大学生)
- 贵宾: 0.272
- 金币: 19506.4
- 散金: 1704
- 红花: 121
- 帖子: 6591
- 在线: 2780.6小时
- 虫号: 856414
- 注册: 2009-09-25
- 性别: GG
- 专业: 环境微生物学
- 管辖: 微生物
3楼2012-12-08 01:33:41
amq7392
铁杆木虫 (著名写手)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 5031.6
- 散金: 63
- 红花: 9
- 帖子: 1205
- 在线: 784.7小时
- 虫号: 597481
- 注册: 2008-09-09
- 专业: 微生物生理与生物化学
4楼2012-12-08 09:03:46
amq7392
铁杆木虫 (著名写手)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 5031.6
- 散金: 63
- 红花: 9
- 帖子: 1205
- 在线: 784.7小时
- 虫号: 597481
- 注册: 2008-09-09
- 专业: 微生物生理与生物化学
5楼2012-12-08 09:13:34
6楼2015-07-06 09:04:23
