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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 做Western blot ，煮蛋白样,结果变成了黄绿色，怎么回事？
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杜龙飞

银虫 (初入文坛)

[求助] 做Western blot ，煮蛋白样,结果变成了黄绿色，怎么回事？ 已有1人参与

做Western blot ，煮蛋白样,结果沉淀中的蛋白样品煮了1min后变成了黄绿色，怎么回事？有没有人遇到过这种情况啊？
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1楼 2013-10-28 19:51:01
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-10-29 15:58:22
可能loading buffer pH值偏离，我跑胶碰到过，没有什么问题
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行至水穷处，坐看云起时
2楼2013-10-28 19:52:52
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杜龙飞

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by pennchem at 2013-10-28 19:52:52
可能loading buffer pH值偏离，我跑胶碰到过，没有什么问题

我已经换了新的Loading buffer，今天一个师姐告诉我是因为我放的还原剂太多啦，可能是这个原因，下次试试少加点，谢谢你啦
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3楼2013-10-29 15:42:15
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haodanfeng

新虫 (初入文坛)
如果你用这批Loading Buffer 处理其他的样品没出现此现象，只有这批样品出现了此现象，说明这批样品的PH偏酸性，但是这不影响跑胶结果的~
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4楼2013-11-18 17:29:31
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白玉子双

金虫 (小有名气)
煮沸液ph变酸，低于3时loading会变黄
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独立做自己
5楼2016-03-12 23:38:17
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白玉子双

金虫 (小有名气)
可以加pH6.8的Tris调回pH4以上就可以了
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独立做自己
6楼2016-03-12 23:39:38
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白玉子双

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我在做pull down实验时也遇到过，我是在变性后的蛋白溶液中加入0.1微升的loading buffer，颜色就恢复了，我在网上看到的原因是变性溶液太酸，导致变黄，其实input没有变黄，说明确实是IP中蛋白太酸导致，具体更好的解决办法与分析还需大家共同探讨，希望多多交流。
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独立做自己
7楼2016-03-21 20:51:03
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