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renminmin

新虫 (初入文坛)

[求助] western blot实验

western blot电泳时出现个别蛋白样漂移渗透，求高手指教其原因和解决办法？
western blot实验
110.JPG
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分子生化实验经验积累 蛋白电泳 漏样

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1楼 2013-10-23 13:09:52
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woai43

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
renminmin: 金币+2, ★有帮助 2013-10-24 10:41:14
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-10-25 13:26:33
上层胶没有凝好，你的样品都漏到你上层胶与分离胶的界面上了。可能的原因：分离胶用乙醇等液封完，配上层胶的时候没有倒干净，下次配胶可以用滤纸把剩余的乙醇吸干净。还有可能是你上层胶凝的时间不够。
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2楼2013-10-23 14:20:17
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renminmin

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by woai43 at 2013-10-23 14:20:17
上层胶没有凝好，你的样品都漏到你上层胶与分离胶的界面上了。可能的原因：分离胶用乙醇等液封完，配上层胶的时候没有倒干净，下次配胶可以用滤纸把剩余的乙醇吸干净。还有可能是你上层胶凝的时间不够。

首先谢谢你的分析，我再说一下我操作的过程是分离胶凝固约40分钟，浓缩胶凝固一个半小时，加浓缩胶之前我都是用滤纸吸干之后再加的浓缩胶，不知道是怎么回事？这种情况已经出现快一个月了，真心无法解决啊！求高手赶紧给想想办法！
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3楼2013-10-23 16:10:30
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木木山4

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
浓缩胶没有配好吧？？
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4楼2013-10-23 16:42:14
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renminmin

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 木木山4 at 2013-10-23 16:42:14
浓缩胶没有配好吧？？

应该不会吧，都是按照说明书上来的，而且凝固的时间也都加长了，之前只凝固40分钟，现在都凝固一个多小时了，可是情况还是这样。
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5楼2013-10-24 10:39:56
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ljsh

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-10-25 13:27:10
有可能玻璃清洁不彻底干净；或是在装电泳内槽时，用力过猛
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6楼2013-10-24 15:43:46
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xiwenhui

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你把浓缩胶好好做下吧！
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7楼2013-10-25 10:56:23
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
楼主阅读下认真阅读下这个帖子吧：
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=6438403&fpage=1&target=self&page=1
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
8楼2013-10-25 13:33:22
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lixk1988

银虫 (小有名气)
你的电泳缓冲液有问题吧
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9楼2013-10-25 20:40:31
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wodexinqin

铁杆木虫 (著名写手)

为卿痴狂 傻瓜帮帮主

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-10-27 01:35:53
如果，板子和夹子不匹配，你在配胶的过程中，可能没发现什么问题，胶也没有漏，但是在把胶用夹子固定之后，就有可能导致胶板变形，或微漏小的移位等，这时候就会使得胶与板子之间产生空隙，样品就会漏掉。
这种时候，其实楼主自己好好想想自己的过程及反常现象，应该会找到原因的，自己才是最有可能解决这种问题的。
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其实我对自己也并不十分了解……
10楼2013-10-26 19:31:02
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