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doughtiness

新虫 (小有名气)

[交流] 重组酵母表达了,但是蛋白没有了活力是什么原因 已有4人参与

各位虫友们,你们好!用了半年的时间做重组酵母,把大肠杆菌里的目的基因连接到酵母表达载体pPICZαA,重组好的酵母表达了,但是蛋白没有活力了。请问你们遇到过在酵母中蛋白表达了但是没有活力的情况吗?
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phoenix211

金虫 (小有名气)

第一天第二天表达量比较低吧   一般都诱导个三四天起码  要么就是这个蛋白在酵母里就是没活性
5楼2013-10-24 10:27:47
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牧炀

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我做的时候同一批结果  第一天测不出活性  隔两天再测又有了...虽然很小..我也不知道
2楼2013-10-22 21:13:47
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doughtiness

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 牧炀 at 2013-10-22 21:13:47
我做的时候同一批结果  第一天测不出活性  隔两天再测又有了...虽然很小..我也不知道

那你接下来实验怎么做的啊?我第一天测了没有活力,第二天测了还没有,我直接给倒掉了
3楼2013-10-23 18:14:02
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heroxuning

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-10-24 17:44:47
引用回帖:
3楼: Originally posted by doughtiness at 2013-10-23 18:14:02
那你接下来实验怎么做的啊?我第一天测了没有活力,第二天测了还没有,我直接给倒掉了...

是不是表达量太低的缘故啊?酵母换诱导培养基,一般要诱导表达3-4天,目的蛋白才会有积累。如果目的蛋白表达量本来就很小,诱导时间又不足,当然就检测不到活性了。建议楼主诱导四天,每天取样SDS-PAGE检测,同时检测每天的活性
4楼2013-10-24 09:41:01
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