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doughtiness

新虫 (小有名气)

[交流] 重组酵母表达了，但是蛋白没有了活力是什么原因 已有4人参与

各位虫友们，你们好！用了半年的时间做重组酵母，把大肠杆菌里的目的基因连接到酵母表达载体pPICZαA，重组好的酵母表达了，但是蛋白没有活力了。请问你们遇到过在酵母中蛋白表达了但是没有活力的情况吗？
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1楼 2013-10-22 14:13:31
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牧炀

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我做的时候同一批结果  第一天测不出活性  隔两天再测又有了...虽然很小..我也不知道
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2楼2013-10-22 21:13:47
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doughtiness

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 牧炀 at 2013-10-22 21:13:47
我做的时候同一批结果  第一天测不出活性  隔两天再测又有了...虽然很小..我也不知道

那你接下来实验怎么做的啊？我第一天测了没有活力，第二天测了还没有，我直接给倒掉了
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3楼2013-10-23 18:14:02
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heroxuning

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-10-24 17:44:47
引用回帖:
3楼: Originally posted by doughtiness at 2013-10-23 18:14:02
那你接下来实验怎么做的啊？我第一天测了没有活力，第二天测了还没有，我直接给倒掉了...

是不是表达量太低的缘故啊？酵母换诱导培养基，一般要诱导表达3-4天，目的蛋白才会有积累。如果目的蛋白表达量本来就很小，诱导时间又不足，当然就检测不到活性了。建议楼主诱导四天，每天取样SDS-PAGE检测，同时检测每天的活性
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4楼2013-10-24 09:41:01
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phoenix211

金虫 (小有名气)
第一天第二天表达量比较低吧   一般都诱导个三四天起码  要么就是这个蛋白在酵母里就是没活性
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5楼2013-10-24 10:27:47
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世纪神兽

铁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
话说现在的基因工程真那么容易把基因转来转去吗？大三，不信这么厉害啊..

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6楼2013-10-24 11:18:58
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