| 查看: 1371 | 回复: 3 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
wendywan铁杆木虫 (小有名气)
|
[求助]
real time PCR 结果很诡异，求助高手啊！！！
|
|
|
最近一直做关于VEGF gene 的Real time PCR 试验，用的是roche 480跑的pcr。 诡异的地方在于： 1 第一次sample 浓度为50ng/ul,20ul体系上样6ul，GAPDH 作为内参，结果显示出来的CT值为9-10左右，组内有人说GAPDH一般在13-15左右才会用，低于13都不会用。觉得我应该稀释模板。但是第一次改有的趋势都正常。且BDNF作为阳性ctrl，也是正常的。 2 第二次用同样的sample做。模板浓度稀释为10ng/ul。上样5ul。还是GAPDH作为内参。这次的结果是GAPDH 的平均CT 值在14-16之间。结果目的基因出来的结果是该减少的全部增加了。不知道哪次的结果是正常的？ 想问的还有：一般在RNA提出来是测的浓度，作为矫正内参的参考。之后在测cDNA浓度是否没啥用处了，有人说在做反转时加了dNTP后，会影响吸光值，所以cDNA的浓度压根就不准。是否是这样的？ 为什么模板稀释的浓度不一样，会出现这么大的差异？像我这种情况，究竟哪次的结果比较准确？ 期待大家的帮忙啊！捉急。。。。。。。 |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有144人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- PCR困惑求助！非常急！
已经有6人回复
- SYBR green 1 real-time PCR 结果分析
已经有4人回复
- Real-time PCR溶解曲线Tm值，是不是在不同的仪器上做出来的不一样？
已经有5人回复
- 帮我看看我的PCR那可能出了状况~
已经有14人回复
- 荧光定量扩增效率问题
已经有6人回复
- 求助microRNA real time pcr结果分析
已经有4人回复
- QPCR之 扩增效率
已经有8人回复
- QPCR扩增效率太低
已经有20人回复
- QPCR之 扩增效率
已经有8人回复
- RT-PCR高手请进
已经有4人回复
- RT-PCR高手请进
已经有10人回复
- real time PCR NTC 阳性扩增
已经有5人回复
- 关于Real-time RT-PCR原理、操作过程及应用
已经有13人回复
- 着急！RT-PCR扩增效率低，情况很诡异，求助高手帮忙指点
已经有12人回复
- Real time PCR的扩增片段为什么要在150-250之间，为什么不易过长？
已经有12人回复
- realtimePCR引物
已经有11人回复
- 请教real time pcr问题，谢谢！
已经有10人回复
- 【专题】real time pcr目的基因的融解曲线不明白
已经有8人回复
wendywan
铁杆木虫 (小有名气)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 5979.8
- 散金: 5
- 红花: 5
- 帖子: 233
- 在线: 484.1小时
- 虫号: 1373315
- 注册: 2011-08-19
- 专业: 神经生物学
3楼2013-10-17 13:00:34
taccycle
铜虫 (小有名气)
- 应助: 14 (小学生)
- 金币: 112.9
- 帖子: 60
- 在线: 19.5小时
- 虫号: 2364578
- 注册: 2013-03-21
- 性别: GG
- 专业: 遗传学研究新技术与方法
2楼2013-10-17 12:12:42
taccycle
铜虫 (小有名气)
- 应助: 14 (小学生)
- 金币: 112.9
- 帖子: 60
- 在线: 19.5小时
- 虫号: 2364578
- 注册: 2013-03-21
- 性别: GG
- 专业: 遗传学研究新技术与方法
4楼2013-10-17 13:07:19
5