应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蛋白异源表达，条带大小不对啊
51/1返回列表
查看: 3944  |  回复: 12
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

宸登abc

银虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白异源表达，条带大小不对啊已有1人参与

求高人指点，最近在做蛋白表达，枯草中的基因在大肠杆菌中表达。蛋白电泳明显有特异性条带，但是大小不对，差了将近10kD，测序也是正确的，而且表达出的蛋白是有酶活的。载体用的是pet30a，求指导！！！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
向学术狂人前进！！！
1楼2013-10-13 16:59:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by 宸登abc at 2013-10-14 09:36:18
嗯，但是我觉得应该是蛋白后面的部分被切割了，因为his-tag在后面，但是我纯不出来，有没有这种情况？...

如果测序正确，一般不会有你说的情况。用his抗体做一下western，确定目标条带是否还带着tag。
赞一下 回复此楼
9楼2013-10-14 15:22:02
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

wcfbio

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-10-14 08:26:59
宸登abc: 金币+2, ★有帮助 2013-10-14 09:29:13
这种情况我也遇到过，我也用大肠杆菌做蛋白表达是大肠杆菌BL21，也出现过这种情况，蛋白质电泳的结果一般只能做个大致的参考，有时候蛋白折叠，或者其他原因可能会导致蛋白分子量稍大一些，如何测序正确还有酶活的话，应该是没什么问题的。
赞一下(1人) 回复此楼
对于誓言一定要实现。
2楼2013-10-13 23:25:23
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-10-14 08:27:04
SDS-PAGEs上的表观分子量与理论不符的情况很多，是正常现象。如果测序正确也有酶活，蛋白应该是对的。可以继续往下实验。如果你不放心，可以过一个分子筛看看。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2013-10-14 00:11:00
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bolysu

禁虫 (著名写手)
★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-10-16 10:28:08
本帖内容被屏蔽
4楼2013-10-14 09:07:51
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭