| 查看: 1219 | 回复: 4 | |||
[交流]
【求助】新手求助！关于蛋白质异源表达纯化的问题 已有2人参与
|
|
最近开始学习做蛋白质异源表达纯化，有一些问题想向大家请教： 1. 我用的是GE的GST纯化系统，把beads和细菌裂解液4℃过夜混合，把beads加上样缓冲液煮沸5 min，之后跑page胶发现有两条十分明亮的带，一条大小和纯GST Tag一致（27kDa），另一条和Tag+目的蛋白大小一致（40kDa）。按我理解，不应该有单独的GST吧。请问这样有人遇到过这种情况吗？ 2. 我把上述beads用凝血酶4℃过夜酶切，离心后把上清和沉淀分别跑胶。沉淀中只有27kDa的带，而检测不到40kDa的带，说明目的蛋白应该是从Tag上切下来了，可是上清里没有预想中的13kDa条带。这有可能是因为蛋白质降解吗？ 3. 我的上清里能够观察到很淡的Tag条带，洗脱的时候是不是也会洗下少量Tag？ 谢谢大家！O(∩_∩)O |
回复此楼» 猜你喜欢
Dordaviprone（ONC201）：小分子药物在中线胶质瘤中的应用
已经有0人回复
-
依喜替康：新型喜树碱衍生物的研究进展
已经有1人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有110人回复
-
膀胱癌靶向治疗新选择：厄达替尼作用机制与耐药研究进展
已经有0人回复
-
从水母到实验室：腔肠素的发现历程与生物发光奥秘
已经有1人回复
-
线粒体氧化磷酸化的新靶点：S-Gboxin的发现与研究进展
已经有0人回复
-
PROTAC药物开发选择VHL配体：MDK-7526以87%出口向量占有率成首选
已经有0人回复
-
MCC950：NLRP3炎症小体特异性抑制剂的科研应用与前景
已经有0人回复
-
康替唑胺研发17年：如何解决多重耐药菌感染难题
已经有0人回复
-
伊曲莫德（Etrasimod）从“肠道免疫失控”到精准靶向干预
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 毕赤表达一酶基因，跑蛋白电泳只有一条带，是不是不用纯化了呀
已经有10人回复
- 基因工程课程小结
已经有20人回复
- 融合蛋白不挂柱，急！
已经有7人回复
- 膜蛋白表达问题
已经有15人回复
- 【求助/交流】关于基因组纯化的问题：异丙醇法
已经有6人回复
- 【求助】蛋白质建模没有同源模板怎么解决？
已经有11人回复
- 【分享】蛋白质纯化个人总结2
已经有38人回复
- 有关感受态细胞DH5a的基因型
已经有6人回复
kx444555
至尊木虫 (正式写手)
- 应助: 56 (初中生)
- 贵宾: 1.326
- 金币: 10554.2
- 散金: 288
- 红花: 12
- 帖子: 820
- 在线: 238小时
- 虫号: 999718
- 注册: 2010-04-18
- 性别: GG
- 专业: 植物遗传学
2楼2013-04-05 21:36:09
gaojuan1985
新虫 (正式写手)
- 应助: 57 (初中生)
- 金币: 75.5
- 散金: 839
- 红花: 8
- 帖子: 561
- 在线: 119.6小时
- 虫号: 1374933
- 注册: 2011-08-21
- 性别: MM
- 专业: 生物化学
3楼2013-04-07 09:05:04
4楼2013-04-07 10:08:43
kx444555
至尊木虫 (正式写手)
- 应助: 56 (初中生)
- 贵宾: 1.326
- 金币: 10554.2
- 散金: 288
- 红花: 12
- 帖子: 820
- 在线: 238小时
- 虫号: 999718
- 注册: 2010-04-18
- 性别: GG
- 专业: 植物遗传学
5楼2013-04-07 22:39:32