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【求助】新手求助！关于蛋白质异源表达纯化的问题 已有2人参与
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最近开始学习做蛋白质异源表达纯化，有一些问题想向大家请教： 1. 我用的是GE的GST纯化系统，把beads和细菌裂解液4℃过夜混合，把beads加上样缓冲液煮沸5 min，之后跑page胶发现有两条十分明亮的带，一条大小和纯GST Tag一致（27kDa），另一条和Tag+目的蛋白大小一致（40kDa）。按我理解，不应该有单独的GST吧。请问这样有人遇到过这种情况吗？ 2. 我把上述beads用凝血酶4℃过夜酶切，离心后把上清和沉淀分别跑胶。沉淀中只有27kDa的带，而检测不到40kDa的带，说明目的蛋白应该是从Tag上切下来了，可是上清里没有预想中的13kDa条带。这有可能是因为蛋白质降解吗？ 3. 我的上清里能够观察到很淡的Tag条带，洗脱的时候是不是也会洗下少量Tag？ 谢谢大家！O(∩_∩)O |
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