| 查看: 1905 | 回复: 4 | ||||
dingcong1216新虫 (小有名气)
|
[求助]
急！3‘race 反转录程序
|
|
第一次做3‘race，师兄告诉我3’race反转录体系是： 5×PrimeScript Buffer(for Real Time) 2μL PrimeScript RT Enzyme Mix I 0.5μL 3'Race aptor 1 μL Total RNA RNase Free dH2O up to 10μL 可是不知道反转录程序是什么，是普通的反转录程序 37度 15min 85度 5S 4度 还是42度 60min 70 度 15min |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 RACE |
» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有112人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 3‘s race PCR问题
已经有19人回复
- 3‘RACE实验好不好做
已经有12人回复
- 求3‘RACE引物设计
已经有4人回复
- 助啊，为什么我的microrRNA提不出来啊？？？为什么啊？
已经有10人回复
- 基因克隆失败原因，求助！
已经有10人回复
- 3‘RACE出现了单引物扩增
已经有7人回复
- 关于3' RACE 测序结果分析。
已经有4人回复
- 求助，关于pcr扩增后产物序列在ncbi上的比对，以及3' race接头引物的设计。。
已经有6人回复
- 3‘race 求助，急
已经有22人回复
- 3’RACE扩增技术
已经有14人回复
- 3‘RACE inner PCR 电泳结果总是有弥散现象回收条带不成带状什么原因啊？
已经有17人回复
- 3'RACE测序结果求助
已经有11人回复
- 采用巢式PCR扩增
已经有4人回复
- 【求助/交流】3'RACE 结果有问题～～～
已经有8人回复
- 【求助/交流】3'RACE求助
已经有15人回复
- 【求助/交流】从RNA到cDNA合成再到克隆PCR的实验技巧和操作细节问题若干，寻求解答
已经有12人回复
- 【求助/交流】逆转录第一链cDNA是否成功了，帮忙看一下
已经有5人回复
dingcong1216
新虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 380.7
- 散金: 15
- 帖子: 52
- 在线: 45.4小时
- 虫号: 2472660
- 注册: 2013-05-20
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
2楼2013-10-13 10:08:13
yany19900707
铁虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 64.1
- 帖子: 31
- 在线: 24.5小时
- 虫号: 2729305
- 注册: 2013-10-16
- 性别: MM
- 专业: 系统生物学
3楼2013-10-16 16:57:22
dingcong1216
新虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 380.7
- 散金: 15
- 帖子: 52
- 在线: 45.4小时
- 虫号: 2472660
- 注册: 2013-05-20
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
4楼2013-10-17 16:43:59
★ ★ ★ ★
kx444555: 金币+4, 鼓励交流 2013-10-20 18:21:19
kx444555: 金币+4, 鼓励交流 2013-10-20 18:21:19
|
● 使用实验样品 RNA 时的实验操作方法1. 反转录反应。反应体系及反应条件如下： ◆ 反应体系: 试剂 使用量 RNA* X μl* 3′ RACE Adaptor（5 μM） 1 μl 5×PrimeScript Buffer 2 μl dNTP Mixture（10 mM each） 1 μl RNase Inhibitor（40 U/μl） 0.25 μl PrimeScript RTase（200 U/μl） 0.25 μl RNase Free dH2O 5.5-X μl Total Volume 10 μl* 一般情况下，Total RNA的使用量为1 μg，Poly(A)+RNA的使用量为50 ng。增加模板RNA的使用量有时会使反应性能下降，不建议使用大于1 μg的Total RNA。 ◆ 反应条件* 42℃, 60 min↓ 70℃, 15 min 反应结束后可以进行下一步实验或将反应液保存于-20℃。* 对于立体结构复杂的基因，可以先将 RNA 变性后再进行反转录反应。具体操作为：首先将 RNA和引物的混合物 70℃变性 10 分钟，冰上急冷，然后再加入反转录反应的其余试剂，进行 42℃、60 分钟的延伸反应。 |
5楼2013-10-20 16:38:43
40