应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 助啊，为什么我的microrRNA提不出来啊？？？为什么啊？
111/2返回列表12下一页
查看: 1387  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

dmtxbb

金虫 (正式写手)

[求助] 助啊，为什么我的microrRNA提不出来啊？？？为什么啊？

1. 液氮研磨后加入Trizol提取，氯仿抽提，异丙醇沉淀，酒精洗脱。

2. RNA跑胶检测无降解无蛋白质污染

3. 反转录16微RNA+1.6微反转录引物

反转录体系：M-MLV 1微

Buffer 5微

DNTP 1.3微

RNASE 0.7微

反转录程序：16度 30min

(30度 30s 42度 30s 50度 1s )60个循环

70度 5min

miR952 序列 AACGAGGATCCATTGGAG

茎环引物5'gtcgtatccagtgcagggtccgaggtattcgcactggatacgacCTCCAA 3'

正向引物GCCGCAACGAGGATCCA

通用反向引物gtgcagggtccgaggt

这是我的体系，大家帮我看看为什么扩增不出来啊？我是提了rna直接扩增的。提了好多次都扩增不出来，大家帮我看看是哪里出问题了啊？？？谢谢啊！
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

分子生化实验经验积累

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-05-14 15:49:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

yangyufen

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
dmtxbb: 金币+5, ★★★很有帮助, 能不能再具体说一下么，谢谢谢谢 2013-05-14 18:18:41
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-15 03:10:01
这种提取方法提取RNA纯度不够吧，然后扩增程序温度怎么都这么低的说？
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2013-05-14 16:47:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chlorella409

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
dmtxbb: 金币+5, ★★★很有帮助, 能不能再具体说一下呢？谢谢谢谢 2013-05-14 18:18:18
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-05-15 03:10:12
没有听说过用异丙醇沉淀microRNA的，而且microRNA跑胶也看不到啊，所以不确定你提出来的是microRNA
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2013-05-14 17:04:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

dmtxbb

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yangyufen at 2013-05-14 16:47:54
这种提取方法提取RNA纯度不够吧，然后扩增程序温度怎么都这么低的说？

那用什么方法啊，polya尾法么？
温度应该多少啊？谢谢谢谢啊
赞一下 回复此楼
4楼2013-05-14 18:16:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dmtxbb

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by chlorella409 at 2013-05-14 17:04:42
没有听说过用异丙醇沉淀microRNA的，而且microRNA跑胶也看不到啊，所以不确定你提出来的是microRNA

不会吧。。。。难道我做的都是错的。。。我用异丙醇沉淀的是rna啊。。总rna啊~难道不对么？我扩出来过，难道不是microrna么？？大侠都是用什么检测的啊？
赞一下 回复此楼
5楼2013-05-14 18:17:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

9号逐梦客

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
dmtxbb: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-05-14 19:00:55
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-05-15 03:10:31
我以前做过，普通提RNA的方法也是可以提的，就是逆转录要注意改变了。还有就是 可以用现有的microRNA提取试剂盒来纯化，比如ABI公司的。你可以找找，这种东西应该有很多了。
赞一下 回复此楼
为了梦想不断坚持在路上
6楼2013-05-14 18:46:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dmtxbb

金虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 9号逐梦客 at 2013-05-14 18:46:59
我以前做过，普通提RNA的方法也是可以提的，就是逆转录要注意改变了。还有就是 可以用现有的microRNA提取试剂盒来纯化，比如ABI公司的。你可以找找，这种东西应该有很多了。

我逆转录的时候注意了，是用特异的引物去扩增的。。不知道这样行么？还有你说的试剂盒是全套都是试剂盒？还是提出rna来然后试剂盒纯化一下？谢谢
赞一下 回复此楼
7楼2013-05-14 19:00:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

9号逐梦客

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
dmtxbb(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-05-15 03:10:47
dmtxbb: 金币+1, ★有帮助, 谢谢，我试试 2013-05-22 14:28:41
引用回帖:
7楼: Originally posted by dmtxbb at 2013-05-14 19:00:48
我逆转录的时候注意了，是用特异的引物去扩增的。。不知道这样行么？还有你说的试剂盒是全套都是试剂盒？还是提出rna来然后试剂盒纯化一下？谢谢...

好像是microRNA的提取和纯化在一起的，你可以去ABI公司查查看，会有的，具体我不是很清楚，我当时做的时候没有用那个试剂盒。
赞一下 回复此楼
为了梦想不断坚持在路上
8楼2013-05-14 23:37:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chlorella409

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
dmtxbb: 金币+3, ★★★很有帮助, 谢谢，我试试 2013-05-22 14:28:27
异丙醇沉淀是没有选择性的，DNA和RNA都可以沉淀，microRNA提取用trizol处理后，一般直接用吸附柱吸附，microRNA的量是很少的，而且又很小才20NT左右，很怀疑异丙醇能不能沉淀这么小的RNA，我使用过国内的吸附柱和Qiagen的，还是国外的好一点。
赞一下 回复此楼
9楼2013-05-15 08:50:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

植物园园长

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
dmtxbb: 金币+3, ★有帮助, 试剂盒有点小贵呢 2013-05-22 14:27:38
用天根的microRNA提取，检测试剂盒吧，很多人都在用，也发了很多大文章。
下周天根将组织microRNA研讨会，感兴趣的可报名参加～
http://www.tiangen.com/?newsShow/t/159/id/50.html
赞一下 回复此楼
在路上～～Marketing!
10楼2013-05-15 08:53:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 dmtxbb 的主题更新
111/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 【考研调剂】化学专业 281分，一志愿四川大学，诚心求调剂 +8 吃吃吃才有意义 2026-03-19 8/400 2026-03-21 00:49 by 刘国森
[考研] 材料专业求调剂 +6 hanamiko 2026-03-18 6/300 2026-03-21 00:24 by JourneyLucky
[考研] 材料专硕英一数二306 +7 z1z2z3879 2026-03-18 7/350 2026-03-20 23:48 by JourneyLucky
[考研] 294求调剂材料与化工专硕 +15 陌の森林 2026-03-18 15/750 2026-03-20 23:28 by JourneyLucky
[考研] 330求调剂 +4 小材化本科 2026-03-18 4/200 2026-03-20 23:13 by JourneyLucky
[考研] 304求调剂 +7 司空. 2026-03-18 7/350 2026-03-20 23:08 by JourneyLucky
[考研] 一志愿华中农业071010，总分320求调剂 +3 困困困困坤坤 2026-03-20 3/150 2026-03-20 20:38 by 学员8dgXkO
[考研] 295材料求调剂，一志愿武汉理工085601专硕 +5 Charlieyq 2026-03-19 5/250 2026-03-20 20:35 by JourneyLucky
[考研] 材料学求调剂 +4 Stella_Yao 2026-03-20 4/200 2026-03-20 20:28 by ms629
[考研] 一志愿西安交通大学 学硕 354求调剂 +3 我想要读研究生 2026-03-20 3/150 2026-03-20 20:13 by JourneyLucky
[考研] 招收调剂硕士 +4 lidianxing 2026-03-19 12/600 2026-03-20 12:25 by lidianxing
[考研] 材料与化工求调剂 +7 为学666 2026-03-16 7/350 2026-03-19 14:48 by 尽舜尧1
[考研] 材料工程专硕调剂 +5 204818@lcx 2026-03-17 6/300 2026-03-18 22:55 by 204818@lcx
[考研] 材料，纺织，生物（0856、0710），化学招生啦 +3 Eember. 2026-03-17 9/450 2026-03-18 10:28 by Eember.
[考研] 268求调剂 +6 简单点0 2026-03-17 6/300 2026-03-18 09:04 by 无际的草原
[考研] 考研求调剂 +3 橘颂. 2026-03-17 4/200 2026-03-17 21:43 by 有只狸奴
[考研] 326求调剂 +4 诺贝尔化学奖觊� 2026-03-15 7/350 2026-03-16 17:11 by 诺贝尔化学奖觊�
[考研] 一志愿211 0703方向310分求调剂 +3 努力奋斗112 2026-03-15 3/150 2026-03-16 16:44 by houyaoxu
[考研] 288求调剂 +4 奇点0314 2026-03-14 4/200 2026-03-14 23:04 by JourneyLucky
[考研] 复试调剂 +3 呼呼？~+123456 2026-03-14 3/150 2026-03-14 16:53 by WTUChen
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭