应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 助啊，为什么我的microrRNA提不出来啊？？？为什么啊？
汕头大学海洋科学接受调剂
51/1返回列表
查看: 1446  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

dmtxbb

金虫 (正式写手)

[求助] 助啊，为什么我的microrRNA提不出来啊？？？为什么啊？

1. 液氮研磨后加入Trizol提取，氯仿抽提，异丙醇沉淀，酒精洗脱。

2. RNA跑胶检测无降解无蛋白质污染

3. 反转录16微RNA+1.6微反转录引物

反转录体系：M-MLV 1微

Buffer 5微

DNTP 1.3微

RNASE 0.7微

反转录程序：16度 30min

(30度 30s 42度 30s 50度 1s )60个循环

70度 5min

miR952 序列 AACGAGGATCCATTGGAG

茎环引物5'gtcgtatccagtgcagggtccgaggtattcgcactggatacgacCTCCAA 3'

正向引物GCCGCAACGAGGATCCA

通用反向引物gtgcagggtccgaggt

这是我的体系，大家帮我看看为什么扩增不出来啊？我是提了rna直接扩增的。提了好多次都扩增不出来，大家帮我看看是哪里出问题了啊？？？谢谢啊！
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

分子生化实验经验积累

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-05-14 15:49:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dmtxbb

金虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 9号逐梦客 at 2013-05-14 18:46:59
我以前做过，普通提RNA的方法也是可以提的，就是逆转录要注意改变了。还有就是 可以用现有的microRNA提取试剂盒来纯化，比如ABI公司的。你可以找找，这种东西应该有很多了。

我逆转录的时候注意了，是用特异的引物去扩增的。。不知道这样行么？还有你说的试剂盒是全套都是试剂盒？还是提出rna来然后试剂盒纯化一下？谢谢
赞一下 回复此楼
7楼2013-05-14 19:00:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

yangyufen

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
dmtxbb: 金币+5, ★★★很有帮助, 能不能再具体说一下么，谢谢谢谢 2013-05-14 18:18:41
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-15 03:10:01
这种提取方法提取RNA纯度不够吧，然后扩增程序温度怎么都这么低的说？
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2013-05-14 16:47:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chlorella409

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
dmtxbb: 金币+5, ★★★很有帮助, 能不能再具体说一下呢？谢谢谢谢 2013-05-14 18:18:18
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-05-15 03:10:12
没有听说过用异丙醇沉淀microRNA的，而且microRNA跑胶也看不到啊，所以不确定你提出来的是microRNA
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2013-05-14 17:04:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dmtxbb

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yangyufen at 2013-05-14 16:47:54
这种提取方法提取RNA纯度不够吧，然后扩增程序温度怎么都这么低的说？

那用什么方法啊，polya尾法么？
温度应该多少啊？谢谢谢谢啊
赞一下 回复此楼
4楼2013-05-14 18:16:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 085404 22408 309分求调剂 +7 lzmk 2026-04-14 7/350 2026-04-14 17:02 by lihaoda1994
[考研] 297工科调剂? +13 河南农业大学-能 2026-04-13 13/650 2026-04-14 16:46 by Art1977
[考研] 材料专业344求调剂 +17 hualkop 2026-04-10 22/1100 2026-04-14 16:21 by sxdj2
[考研] 279学硕食品专业求调剂院校 20+6 孤独的狼爱吃羊 2026-04-12 28/1400 2026-04-14 15:44 by zs92450
[考研] 本科211，报考085601-310分 +16 ararak 2026-04-13 16/800 2026-04-14 14:55 by Delta2012
[考研] 284求调剂 +17 让我上岸吧阿西 2026-04-09 17/850 2026-04-14 14:44 by 不我拉绿卡
[考研] 农学0904 312求调剂 +4 Say Never 2026-04-11 4/200 2026-04-14 09:10 by zs92450
[考研] 302求调剂 +10 易！? 2026-04-13 10/500 2026-04-13 19:04 by lbsjt
[考研] 290求调剂 +18 柯淮然 2026-04-12 20/1000 2026-04-13 12:56 by cyh—315
[考研] 322求调剂 +6 123安康 2026-04-12 13/650 2026-04-12 15:51 by 123安康
[考研] 339求调剂 +8 hanwudada 2026-04-11 9/450 2026-04-12 15:36 by laoshidan
[考研] 085410 273求调剂 +10 X1999 2026-04-09 10/500 2026-04-12 09:24 by 逆水乘风
[考研] 电子信息279求调剂，有书读就行 +8 wwwooden 2026-04-08 11/550 2026-04-11 20:22 by cq2548
[考研] 283求调剂 086004考英二数二 +17 那个噜子 2026-04-10 18/900 2026-04-11 16:27 by 明月此时有
[考研] 22408 327分求调剂 +4 韵风kon 2026-04-10 4/200 2026-04-11 09:51 by 猪会飞
[考研] 调剂 +12 卷卷卷心菜_ 2026-04-09 13/650 2026-04-10 22:36 by Ftglcn90
[考研] 求调剂 +5 不会飞的鱼@ 2026-04-10 5/250 2026-04-10 19:07 by chemisry
[考研] 085501机械英二77总分294求调剂，接受跨专业学习 +6 守法公民亓纪 2026-04-08 6/300 2026-04-09 15:55 by wp06
[考研] 调剂 +12 月@163.com 2026-04-08 12/600 2026-04-09 14:27 by rl1980
[考研] 085404，334分，求调剂 +5 sunjie8888 2026-04-08 8/400 2026-04-09 07:26 by sunjie8888
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭