应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 助啊，为什么我的microrRNA提不出来啊？？？为什么啊？
汕头大学海洋科学接受调剂
51/1返回列表
查看: 1443  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

dmtxbb

金虫 (正式写手)

[求助] 助啊，为什么我的microrRNA提不出来啊？？？为什么啊？

1. 液氮研磨后加入Trizol提取，氯仿抽提，异丙醇沉淀，酒精洗脱。

2. RNA跑胶检测无降解无蛋白质污染

3. 反转录16微RNA+1.6微反转录引物

反转录体系：M-MLV 1微

Buffer 5微

DNTP 1.3微

RNASE 0.7微

反转录程序：16度 30min

(30度 30s 42度 30s 50度 1s )60个循环

70度 5min

miR952 序列 AACGAGGATCCATTGGAG

茎环引物5'gtcgtatccagtgcagggtccgaggtattcgcactggatacgacCTCCAA 3'

正向引物GCCGCAACGAGGATCCA

通用反向引物gtgcagggtccgaggt

这是我的体系，大家帮我看看为什么扩增不出来啊？我是提了rna直接扩增的。提了好多次都扩增不出来，大家帮我看看是哪里出问题了啊？？？谢谢啊！
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

分子生化实验经验积累

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-05-14 15:49:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chlorella409

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
dmtxbb: 金币+5, ★★★很有帮助, 能不能再具体说一下呢？谢谢谢谢 2013-05-14 18:18:18
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-05-15 03:10:12
没有听说过用异丙醇沉淀microRNA的，而且microRNA跑胶也看不到啊，所以不确定你提出来的是microRNA
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2013-05-14 17:04:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

yangyufen

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
dmtxbb: 金币+5, ★★★很有帮助, 能不能再具体说一下么，谢谢谢谢 2013-05-14 18:18:41
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-15 03:10:01
这种提取方法提取RNA纯度不够吧，然后扩增程序温度怎么都这么低的说？
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2013-05-14 16:47:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dmtxbb

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yangyufen at 2013-05-14 16:47:54
这种提取方法提取RNA纯度不够吧，然后扩增程序温度怎么都这么低的说？

那用什么方法啊，polya尾法么？
温度应该多少啊？谢谢谢谢啊
赞一下 回复此楼
4楼2013-05-14 18:16:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dmtxbb

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by chlorella409 at 2013-05-14 17:04:42
没有听说过用异丙醇沉淀microRNA的，而且microRNA跑胶也看不到啊，所以不确定你提出来的是microRNA

不会吧。。。。难道我做的都是错的。。。我用异丙醇沉淀的是rna啊。。总rna啊~难道不对么？我扩出来过，难道不是microrna么？？大侠都是用什么检测的啊？
赞一下 回复此楼
5楼2013-05-14 18:17:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 085400电子信息类（川大控制工程）求调剂可跨专业 求老师联系 +6 626776879 2026-04-08 6/300 2026-04-14 20:09 by gwjxiaolang
[考研] 复试调剂 +18 积极向上； 2026-04-10 20/1000 2026-04-14 16:11 by zs92450
[考研] 求调剂 +12 何气正 2026-04-13 13/650 2026-04-14 14:47 by zs92450
[考研] 085404 298分求调剂 +11 呼啦呼啦呼呼呼 2026-04-10 12/600 2026-04-14 08:38 by wfj257
[考研] 求调剂 +3 我爱高数高数爱� 2026-04-12 3/150 2026-04-14 01:00 by 王珺璞
[考研] 求调剂 +12 璃茉一定上岸 2026-04-10 13/650 2026-04-14 00:08 by Equinoxhua
[考研] 0831一轮调剂失败求助 +10 小熊睿睿_s 2026-04-11 10/500 2026-04-12 22:43 by 长弓傲
[考研] 22408调剂315分 +3 zhuangyan123 2026-04-09 3/150 2026-04-12 00:25 by 蓝云思雨
[考研] 药学专硕调剂 +8 ? 一路生?花? 2026-04-10 10/500 2026-04-11 21:21 by zhouxiaoyu
[考研] 0859，337求调剂 +4 研s. 2026-04-10 4/200 2026-04-11 11:34 by caotw2020
[考研] 296求调剂 +6 汪！？！ 2026-04-09 6/300 2026-04-11 11:25 by zhq0425
[考研] 283求调剂，工科！ +12 苏打水7777 2026-04-08 12/600 2026-04-11 10:28 by 逆水乘风
[考研] 263能源动力专硕求调剂 +3 加大号饭盒袋 2026-04-10 3/150 2026-04-10 22:23 by 286640313
[考研] 263能源动力专硕求调剂 +4 加大号饭盒袋 2026-04-10 4/200 2026-04-10 20:52 by gong120082
[考研] 求调剂 +5 不会飞的鱼@ 2026-04-10 5/250 2026-04-10 19:07 by chemisry
[考研] 求调剂 +11 翩翩一书生 2026-04-09 13/650 2026-04-10 10:27 by liuhuiying09
[考研] 一志愿中科大070300化学，314分求调剂 +12 wakeluofu 2026-04-09 12/600 2026-04-10 09:57 by liuhuiying09
[考研] 初试分332，一志愿报考西北工业大学， +11 故人?? 2026-04-09 11/550 2026-04-09 21:54 by JineShine
[考研] 070300化学 求调剂 +13 73372112 2026-04-08 13/650 2026-04-09 20:22 by maddjdld
[考研] 332，085601求调剂 +12 ydfyh 2026-04-09 14/700 2026-04-09 17:28 by wp06
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭