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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 荧光定量求助
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xieya1234_0

银虫 (小有名气)

[求助] 荧光定量求助

我现在要做植物病毒的定量PCR，可是我的病毒目的片段是外源，内参基因是植物自身的，因为我的病毒是RNA的，所以不知道反转录是应该怎样进行，是都用随机引物或oligo（dt），还是两个基因分别反转录啊，谢谢了.我做的是相对定量

[ Last edited by xieya1234_0 on 2013-10-10 at 13:32 ]
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1楼 2013-10-10 13:30:27
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yang0071

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
两个基因分别反转录
用随机引物
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2楼2013-10-10 14:10:16
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zhibao214

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-10-11 09:37:41
两种引物都加上反转录就行，或者你用特异性引物分别反转录，不过这样比较麻烦。如果你的病毒RNA后面没有poly A，只用oligo（dt）是不行的，必须用随机引物
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3楼2013-10-11 09:15:06
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xieya1234_0

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by zhibao214 at 2013-10-11 09:15:06
两种引物都加上反转录就行，或者你用特异性引物分别反转录，不过这样比较麻烦。如果你的病毒RNA后面没有poly A，只用oligo（dt）是不行的，必须用随机引物

如果特异引物的话，不是反转录出来就是片段了吗，再做荧光的话就是片段扩片段了
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4楼2013-10-12 10:29:54
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匿名

用户注销 (小有名气)
感谢参与，应助指数 +1
本帖仅楼主可见
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5楼2013-10-12 10:41:04
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zhibao214

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by xieya1234_0 at 2013-10-12 10:29:54
如果特异引物的话，不是反转录出来就是片段了吗，再做荧光的话就是片段扩片段了...

对啊，本来反转录后就是cDNA片段啊，你用特异性引物反转录的时候最好不要和qPCR的引物一样，最好反转录的片段长一些。不过还是建议你加上随机引物和oligo （dT）反转录，这样比较简单
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6楼2013-10-12 17:06:53
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