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zishilanxuan

金虫 (小有名气)

[求助] 蛋白电泳能跑出带来,但是测不出酶活

请教各位大神一个问题,我现在蛋白电泳能跑出我要的条带,但是酶活测不出来,大家有没有遇到这个问题的?谢谢指教……
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feilinshiji

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2013-10-01 17:07:43
有条带不等于有蛋白,一定要做WB验证。如果你是用原核表达系统,产物必须要复性啊
6楼2013-10-01 00:45:24
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alarace

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香。分子生物期待更详细的解答 2013-09-30 10:22:07
蛋白条带差不多但不一定就是你要的目的蛋白吧,目的蛋白上有标签吗?或许鉴定一下比较好。
2楼2013-09-29 21:04:11
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xv1215

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香。分子生物期待更详细的解答 2013-09-30 10:22:16
二楼说的对啊,跑不出不代表是,建议进一步验证,另外你是用什么跑的,蛋白是否已经失活?
3楼2013-09-29 22:24:52
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超然渡陈

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2013-09-30 17:28:37
gyesang: 回帖置顶 2013-09-30 17:28:44
不知道你的蛋白是原核表达的还是从组织中分离纯化的?也不知道你的蛋白是人源还是其它物种的?不管怎么样都应该先用western blotting证明那个是你的蛋白,最好用蛋白的特异抗体,表达的蛋白也可以用蛋白上带有的标签抗体。确认是你的蛋白了才能往后做。只通过跑胶看大小不能说明问题。分离纯化过程蛋白容易变性失活,分离纯化的方法不合适蛋白测不出来活性很正常。原核表达的蛋白没有活性更正常。原核表达的真核来源蛋白不能进行正确的修饰、折叠和加工,没活性太常见了。
4楼2013-09-30 14:17:08
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