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liulugang

木虫 (小有名气)

[求助] 求问44bp线性片段PCR，设计引物时需要注意什么？

求问，44bp长的线性片段PCR扩增，设计引物时需要特别注意什么？
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1楼 2013-09-25 19:28:14
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香分子生物期待你的精彩 2013-09-26 00:05:48
P什么，不直接合成引物然后退火？
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行至水穷处，坐看云起时
2楼2013-09-25 20:36:24
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子非鱼花儿开

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
liulugang: 金币+1, ★有帮助 2013-09-26 16:25:07
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-09-27 15:58:28
这么短的还真没做过，最短的做过60bp的，相对还是比较好扩的。另外两个引物接到一块儿都能扩出来，44bp问题应该不会很大，相对于长片段应该容易一些
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3楼2013-09-26 16:12:29
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liulugang

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by pennchem at 2013-09-25 20:36:24
P什么，不直接合成引物然后退火？

组成型启动子
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4楼2013-09-26 16:24:35
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hl16010921

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-09-28 02:02:59
直接合成吧，太短了，引物二聚体和产物无法分开。就是一对44bp的引物，直接退火
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5楼2013-09-27 15:44:53
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liulugang

木虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by hl16010921 at 2013-09-27 15:44:53
直接合成吧，太短了，引物二聚体和产物无法分开。就是一对44bp的引物，直接退火

片段是合成的，浓度太低，所以想PCR一下
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6楼2013-09-27 16:27:29
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hl16010921

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-09-27 21:22:47
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-09-28 02:03:15
引用回帖:
6楼: Originally posted by liulugang at 2013-09-27 16:27:29
片段是合成的，浓度太低，所以想PCR一下...

引物长度就得20bp左右，实际只增加了1倍的DNA量（引物的量和合成的双链等摩尔）或4倍（等OD值）这是理论产量，实际达不到。为了不到4倍的产量冒不纯的风险，犯不上吧。
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7楼2013-09-27 19:49:21
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feilinshiji

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
大哥别P了，直接合成吧
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8楼2013-09-27 20:58:17
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liulugang

木虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by feilinshiji at 2013-09-27 20:58:17
大哥别P了，直接合成吧

片段是合成的，浓度太低，所以想PCR一下..
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9楼2013-09-28 00:07:46
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白菜吃虫

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
直接连到到载体上，要多少有多少啊
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10楼2013-09-28 00:28:24
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