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[求助] 求问44bp线性片段PCR，设计引物时需要注意什么？

求问，44bp长的线性片段PCR扩增，设计引物时需要特别注意什么？

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1楼 2013-09-25 19:28:14

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引用回帖:

6楼: Originally posted by liulugang at 2013-09-27 16:27:29
片段是合成的，浓度太低，所以想PCR一下...

引物长度就得20bp左右，实际只增加了1倍的DNA量（引物的量和合成的双链等摩尔）或4倍（等OD值）这是理论产量，实际达不到。为了不到4倍的产量冒不纯的风险，犯不上吧。

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7楼2013-09-27 19:49:21

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pennchem

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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香分子生物期待你的精彩 2013-09-26 00:05:48

P什么，不直接合成引物然后退火？

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行至水穷处，坐看云起时

2楼2013-09-25 20:36:24

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liulugang: 金币+1, ★有帮助 2013-09-26 16:25:07
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-09-27 15:58:28

这么短的还真没做过，最短的做过60bp的，相对还是比较好扩的。另外两个引物接到一块儿都能扩出来，44bp问题应该不会很大，相对于长片段应该容易一些

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3楼2013-09-26 16:12:29

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liulugang

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引用回帖:

2楼: Originally posted by pennchem at 2013-09-25 20:36:24
P什么，不直接合成引物然后退火？

组成型启动子

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4楼2013-09-26 16:24:35

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