版块导航: 正在加载中...

客户端APP下载

登录注册

应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜

>论坛更新日志 (3812)
>导师招生 (664)
>考博 (178)
>文献求助 (178)
>虫友互识 (155)
>博后之家 (112)
>微米和纳米 (91)
>硕博家园 (61)
>论文投稿 (53)
>学术会议 (52)
>休闲灌水 (50)
>公派出国 (49)
>教师之家 (40)
>考研 (36)
>基金申请 (24)
>招聘信息布告栏 (23)

blairwang

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 198
帖子: 4
在线: 3小时
虫号: 2609404
注册: 2013-08-21
性别: GG
专业: 人类遗传学

[求助] 长片段PCR 求助！

第一次做long PCR，用的是 QIAGEN 的 LongRange PCR Kit，号称最长能扩到40K。我不管，一上来就分别针对16K、29K、34K和39K的区域设计了四对引物，引物平均长度25b，Tm 68°左右。其中29K和39K的两对引物，primer blast 的结果特异性较好，另外两个不太好。前后做了两次PCR，退火温度为62°和63°，跑了24 hours 以上，对mg2+、模板、高GC buffer 都进行了梯度实验，最后出来跑胶都没有结果，除了几个较暗的大范围弥散条带。请问大家，还有什么因素是我遗漏的，还是说引物设计的不好。。。

» 猜你喜欢

RMC-6291怎么用？RAS(ON) 三重复合物工具化合物的实验室实操要点已经有0人回复
苯并呋咱全解析：NBD 荧光衍生化试剂母核的化学特性与实验室应用已经有0人回复
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费? 已经有150人回复
生物质炭与活化剂氢氧化钾混合注意事项已经有0人回复
科研人必读：新一代 KRAS G12C 抑制剂 Olomorasib 的研究进展已经有0人回复
BT-11（Omilancor）研究化合物全解析：从分子结构到实验应用要点已经有0人回复
富马酸贝达喹啉：二芳基喹啉类工具化合物的化学特征已经有0人回复
BT投稿with editor状态快两周了，正常吗已经有25人回复
Silevertinib（BDTX-1535）结构拆解：炔基双环片段为何成为合成瓶颈已经有0人回复
RO4929097 解析：双苯并氮杂䓬骨架与 Notch 通路实验设计要点已经有0人回复
分子量 1157 的 PROTAC 怎么配不析出：SGK3-PROTAC1 的溶解、分装与图谱复核已经有0人回复

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

1楼 2013-09-25 16:52:01

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

gufeng2008

金虫 (小有名气)

应助: 16 (小学生)
金币: 1127.6
红花: 2
帖子: 163
在线: 366.6小时
虫号: 2815048
注册: 2013-11-20
专业: 生物化学

【答案】应助回帖

如果全部按照试剂盒的条件和程序做，可以咨询QIAGEN！如果不是，自己修改了体系和程序，你的程序和体系写一下？让看看，再分析！

2楼2013-12-04 11:04:11

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

相关版块跳转我要订阅楼主 blairwang 的主题更新