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求助——荧光定量程序设计问题
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在荧光程序设计上 一般说明书上的程序是 95 30s , 95 5s , 60 30s , 39个循环，95 10s ,65 5s , 95 5s 。 其中的60度 退火这一步 可以改成54,55 等其他温度吗？？因为我用不同PCR扩的时候，在54度才有条带，到了60度就什么都没有了，用60度做荧光定量我觉得可定做不出来啊。。（我用60度跑过程序，CT值差不多在35个循环以后，那就不可信了啊） 求大神指点。。。。。急急 [ Last edited by 1949stone on 2013-9-22 at 12:02 ] |
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7楼2013-09-22 21:20:32
8楼2013-09-22 23:50:36
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
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FYI Taq酶只有10%的活性（相对于最佳活性） Taq holoenzyme and Stoffel with two different substrates; in both cases the assay is of course for second strand synthesis. For the holoenzyme the optimal activity is either 75 or 80 C, depending on the substrate. In their graphs the activity does not fall off "rapidly" above the apparent optimum. It is also clear that Taq does have 10% or higher activity at 55 C, which is a common temperature for the annealing step in PCR. |
9楼2013-09-23 11:38:42
wangcheng2650
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