24小时热门版块排行榜    

查看: 1831  |  回复: 13
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

崔t-o-p

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助!!蛋白的提取与纯化

大家好,我做的是一个细菌毒力蛋白的功能研究,这个毒力蛋白从细菌本身不好分离(目的蛋白含量太低)。于是,将其完整表达出来并连接至pET32a上,进行原核表达。表达的融合蛋白以上清的可溶性形式进行后续试验。该毒力蛋白约220KDa,是菌体的分泌蛋白,原核表达产量不高,现在上清中的含量也很低,怎么纯化是个大问题,
    请问大家有什么好的纯化方法,亦或是好的分离该毒力蛋白的有效方法! 跪谢大家!!急急急
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

木_塚

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
崔t-o-p: 金币+5, 有帮助 2013-09-18 09:51:09
得到该蛋白的基因,将其拼接在强启动子下,使其overexpress,然后在用层析就好了。
不作就不会死!
6楼2013-09-13 23:55:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答

RUI1990

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流! 2013-09-13 22:20:15
该目的蛋白应该有蛋白标签吧,亲和层析的方法不行吗?
做自己
2楼2013-09-13 16:06:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

欧阳-90

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
崔t-o-p: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-09-13 18:01:30
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2013-09-13 22:20:21
蛋白含量很低你是怎么判断的呢?只看目的条带的大小吗?或者是做了WB验证?如果是WB验证有你的目的蛋白,只是含量很低,你可以选择先硫酸铵富集该蛋白,在后期处理。
3楼2013-09-13 16:11:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

崔t-o-p

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 欧阳-90 at 2013-09-13 16:11:36
蛋白含量很低你是怎么判断的呢?只看目的条带的大小吗?或者是做了WB验证?如果是WB验证有你的目的蛋白,只是含量很低,你可以选择先硫酸铵富集该蛋白,在后期处理。

就是跑PAGE,看目的条带大小的,我想请问你原核表达的融合蛋白,先破碎之后上清用硫酸铵沉淀富积,这个方法可行吗?
  我之前尝试过破碎后,目的蛋白在沉淀里,上清几乎很少。我的目的是需要有活性的蛋白,越纯越好。。。
4楼2013-09-13 18:08:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂 +3 芦lty 2026-03-25 4/200 2026-03-25 23:25 by 芦lty
[考研] 北科281学硕材料求调剂 +14 tcxiaoxx 2026-03-20 16/800 2026-03-25 23:14 by peike
[考研] 316求调剂 +9 梁茜雯 2026-03-19 9/450 2026-03-25 23:01 by peike
[考研] 考研调剂 +6 呼呼?~+123456 2026-03-24 6/300 2026-03-25 22:55 by 418490947
[考研] 化学工程085602 305分求调剂 +9 RichLi_ 2026-03-25 9/450 2026-03-25 22:21 by 418490947
[考研] 招08考数学 +8 laoshidan 2026-03-20 17/850 2026-03-25 17:52 by 一个红太阳
[考研] 0854AI CV方向招收调剂 +4 章小鱼567 2026-03-23 4/200 2026-03-25 17:04 by CoderLoser
[考研] 081700 调剂 267分 +10 迷人的哈哈 2026-03-23 10/500 2026-03-25 12:12 by userper
[考研] 085600材料与化工调剂 +9 A-哆啦Z梦 2026-03-23 15/750 2026-03-25 11:18 by Ainin_
[考研] 07化学280分求调剂 +7 722865 2026-03-23 7/350 2026-03-25 09:29 by aa331100
[考研] 材料调剂 +6 匹克i 2026-03-23 6/300 2026-03-24 21:09 by greychen00
[考研] 【考研调剂】化学专业 281分,一志愿四川大学,诚心求调剂 +15 吃吃吃才有意义 2026-03-19 16/800 2026-03-24 19:51 by 了了了了。。
[考研] 求调剂 +5 林之夕 2026-03-24 5/250 2026-03-24 17:16 by dick_runner
[考研] 291求调剂 +3 HanBeiNingZC 2026-03-24 3/150 2026-03-24 16:34 by barlinike
[考研] 317求调剂 +12 申子申申 2026-03-19 18/900 2026-03-22 22:23 by luoyongfeng
[考研] 306求调剂 +5 来好运来来来 2026-03-22 5/250 2026-03-22 16:17 by BruceLiu320
[考研] 一志愿东华大学控制学硕320求调剂 +3 Grand777 2026-03-21 3/150 2026-03-21 19:23 by 简之-
[考研] 一志愿南大,0703化学,分数336,求调剂 +3 收到VS 2026-03-21 3/150 2026-03-21 18:42 by 学员8dgXkO
[基金申请] 学校已经提交到NSFC,还能修改吗? 40+4 babangida 2026-03-19 9/450 2026-03-21 16:12 by babangida
[考研] 279求调剂 +5 红衣隐官 2026-03-21 5/250 2026-03-21 14:59 by lature00
信息提示
请填处理意见