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实时荧光定量PCR,但扩增曲线没有平台期!!
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实时荧光定量PCR,但扩增曲线没有平台期!!
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最近在跑实时荧光定量PCR,但扩增曲线没有平台期,郁闷啊,溶解曲线还不错啊!求分析原因,谢谢各位大神了!!!!
aki gi.jpg
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1楼
2013-09-11 12:57:54
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6楼
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Originally posted by
reallpf
at 2013-09-13 14:12:01
溶解曲线还行,但是扩增曲线不行,很直接的问题就是扩增效率的问题。
造成扩增效率低的原因:模板量低,退火温度高,引物浓度等。
多问一句你是用探针还是荧光染料?
减少模板量个人认为不可取。
我用的是SYBR-Green!
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9楼
2013-09-14 08:22:46
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2013-09-11 16:59:46
扩增很差,无S型扩展曲线,是不是你的东西过量了
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2楼
2013-09-11 13:51:37
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at 2013-09-11 13:51:37
扩增很差,无S型扩展曲线,是不是你的东西过量了
模板的浓度太高了?
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3楼
2013-09-11 16:10:37
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3楼
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pksq100056
at 2013-09-11 16:10:37
模板的浓度太高了?...
可能引物,镁离子,酶、dntps浓度过高都有可能,
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4楼
2013-09-11 16:47:36
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