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pksq100056

木虫 (正式写手)

[求助] 实时荧光定量PCR，但扩增曲线没有平台期！！ 已有3人参与

最近在跑实时荧光定量PCR，但扩增曲线没有平台期，郁闷啊，溶解曲线还不错啊！求分析原因，谢谢各位大神了！！！！
实时荧光定量PCR，但扩增曲线没有平台期！！
aki gi.jpg


实时荧光定量PCR，但扩增曲线没有平台期！！-1
aki kuozeng.jpg
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1楼 2013-09-11 12:57:54
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reallpf

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-09-14 09:00:17
溶解曲线还行，但是扩增曲线不行，很直接的问题就是扩增效率的问题。
造成扩增效率低的原因：模板量低，退火温度高，引物浓度等。

多问一句你是用探针还是荧光染料？

减少模板量个人认为不可取。
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6楼2013-09-13 14:12:01
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love_st

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-09-11 16:59:46
扩增很差，无S型扩展曲线，是不是你的东西过量了
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2楼2013-09-11 13:51:37
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pksq100056

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by love_st at 2013-09-11 13:51:37
扩增很差，无S型扩展曲线，是不是你的东西过量了

模板的浓度太高了？
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3楼2013-09-11 16:10:37
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love_st

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-09-11 19:30:47
引用回帖:
3楼: Originally posted by pksq100056 at 2013-09-11 16:10:37
模板的浓度太高了？...

可能引物，镁离子，酶、dntps浓度过高都有可能，
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4楼2013-09-11 16:47:36
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