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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 梯度PCR电泳图求分析
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hqqwdm

新虫 (正式写手)

[求助] 梯度PCR电泳图求分析

初学PCR，做了一个梯度PCR需求退火温度，如下图~
每个样都有两个条带，下面的条带应该为引物二聚体，上面的为目标序列~
改选哪个呢？梯度范围为48-62℃~
感谢各位虫友
梯度PCR电泳图求分析
梯度PCR.jpg
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1楼 2013-08-31 14:38:19
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yilunanxia

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 2013-08-31 18:26:51
hqqwdm: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-09-01 14:42:31
不知道你的PCR仪器用的是哪一家公司的，我从你的图里看3 4 效果能好点。我觉得可以把引物的浓度稍微降低点儿（题外话呵呵）
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2楼2013-08-31 15:36:41
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yb19841014

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
hqqwdm: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-09-01 14:42:39
2，3，4号 ，把引物量下降一半，在做一次
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3楼2013-08-31 22:12:13
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hqqwdm

新虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yilunanxia at 2013-08-31 15:36:41
不知道你的PCR仪器用的是哪一家公司的，我从你的图里看3 4 效果能好点。我觉得可以把引物的浓度稍微降低点儿（题外话呵呵）

bio-rad T100
好的~我试试看把引物浓度降低一点~
谢谢你的回复
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4楼2013-09-01 14:42:01
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hqqwdm

新虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by yb19841014 at 2013-08-31 22:12:13
2，3，4号 ，把引物量下降一半，在做一次

嗯~我再试试看~
谢谢你的回复
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5楼2013-09-01 14:42:23
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2008101111

金虫 (正式写手)

学术江湖混子
建议选3
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自主创业者，捣腾生物试剂
6楼2013-09-02 14:27:50
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grape_vine

金虫 (小有名气)
PCR要是用来做基因克隆的话，其实哪个温度都关系不大，只要不是最后一个扩不出来的就好。如果做检测的话，估计3，4，5温度可用，但是二聚体太多了。可能的话，换个没二聚体的吧
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7楼2013-09-03 08:13:20
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hqqwdm

新虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by grape_vine at 2013-09-03 08:13:20
PCR要是用来做基因克隆的话，其实哪个温度都关系不大，只要不是最后一个扩不出来的就好。如果做检测的话，估计3，4，5温度可用，但是二聚体太多了。可能的话，换个没二聚体的吧

非常感谢~
我尝试减少了引物的量，但是同时PCR产物的量也降低了~所以我就想暂时不管引物二聚体，直接往下做了~
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8楼2013-09-03 13:53:45
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hqqwdm

新虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 2008101111 at 2013-09-02 14:27:50
建议选3

谢谢~~
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9楼2013-09-03 13:53:55
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