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半定量PCR实验技术 已有1人参与
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| 我是初期做RT-PCR的，但是近一个月的时间摸索，仍旧没有条带出现，我的反转录条件是2μlRNA模板，1μl Oligo(dT)，加DEPC水至11μl，混匀，70度，5分钟，立即冰浴，冰上加入M-MLV buffer,dNTP,RNase抑制剂，M-MLV RT ,DEPC水，混匀，稍离心，合成第一链CDNA，随后的扩增过程是加入模板CDNA，10*PCR BUFFER,rTAq聚合酶，dNTP以及上下游引物和灭菌水，混匀离心。不知道我上述的添加成分是否有错呢，我用的是2000Marker，在在Marker的最后一个条带下面出了一条很亮的线，我觉得分子量较小不是目标条带，所以我想问问各位是什么原因，我一直都是做都是这种情况。请求各位高手指点！ |
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2013-08-31 14:31:06, 345.83 K
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yimingwang
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