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紫玉涵轩

铜虫 (小有名气)

[求助] 荧光定量PCR检测病毒含量,具体应该怎么做?

各位资深前辈,小妹在此请教:我最近在用荧光定量PCR检测组织中病毒的含量,进行比较。有师姐说用B-actin做内参,做相对荧光定量;但最近有师姐又说不能用相对荧光定量,应该用绝对荧光定量。我已经制作了标准品质粒,标准曲线。我想问的是,在组织检测的时候需要定量组织的重量吗?在反转录之前需要稀释成同样的浓度吗?
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peakg7

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-08-21 12:20:58
最好定量组织,反转录的时候,可以使用定好的量去加你的模板,像浓度250ng, 你用500ng反转录,加2ul就ok了。
2楼2013-08-21 11:56:36
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iwenfan

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我们的做法:
实验内容:病毒血症的检测,即检测血液中的病毒粒子数
方法:绝对定量PCR。个样品去相同量的全血液或血清,提取总RNA,反转录0.5-1ug总RNA,将获得的cDNA稀释5-20倍,然后按照定量PCR试剂说明书建立体系进行PCR。
也就是说你的样品组织和反转的RNA都应该定量,最终是xcopies/ugRNA.
不断超越&乐于奉献&活得精彩&
3楼2013-08-21 17:24:44
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