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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 荧光定量PCR检测病毒含量，具体应该怎么做？
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紫玉涵轩

铜虫 (小有名气)

[求助] 荧光定量PCR检测病毒含量，具体应该怎么做？

各位资深前辈，小妹在此请教：我最近在用荧光定量PCR检测组织中病毒的含量，进行比较。有师姐说用B-actin做内参，做相对荧光定量；但最近有师姐又说不能用相对荧光定量，应该用绝对荧光定量。我已经制作了标准品质粒，标准曲线。我想问的是，在组织检测的时候需要定量组织的重量吗？在反转录之前需要稀释成同样的浓度吗？
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1楼2013-08-21 10:18:05
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peakg7

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-08-21 12:20:58
最好定量组织，反转录的时候，可以使用定好的量去加你的模板，像浓度250ng， 你用500ng反转录，加2ul就ok了。
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2楼2013-08-21 11:56:36
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iwenfan

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我们的做法：
实验内容：病毒血症的检测，即检测血液中的病毒粒子数
方法：绝对定量PCR。个样品去相同量的全血液或血清，提取总RNA，反转录0.5-1ug总RNA，将获得的cDNA稀释5-20倍，然后按照定量ＰＣＲ试剂说明书建立体系进行ＰＣＲ。
也就是说你的样品组织和反转的ＲＮＡ都应该定量，最终是xcopies/ugRNA.
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不断超越&乐于奉献&活得精彩&
3楼2013-08-21 17:24:44
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