24小时热门版块排行榜    

查看: 1105  |  回复: 7
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

33ggdf

新虫 (小有名气)

[交流] 这两个酶切位点有问题吗? 已有4人参与

最近本人在做Spe1和Sac1这两个酶的双酶切连接实验,可是连接后做热击转化就是不长单菌落,回收分别测了浓度,摩尔比是1:3-1:10,连接时16℃过夜,涂皿再过夜,就是不长单菌落,是什么原因??急得很呐 郁闷!!!!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yhbletter

铜虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
7楼: Originally posted by 33ggdf at 2013-08-13 12:02:57
用的NEB的酶,载体骨架是10K,目的片段是1k。连接试剂盒?我们不用这个的,我的连接体系是10微升,T4连接酶1微升,10倍连接buffer1微升,其他加载体和目的片段,我的两者的浓度是6.0左右纳克/微升,这个浓度是不是有 ...

我们的连接体系里面载体最少是50ng
8楼2013-08-13 14:48:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

yhbletter

铜虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-08-12 17:00:13
1,你这两种酶是哪个公司的
2,你的载体骨架和片段双酶切后分别是多大,是哪个载体
3,抗性是什么
4,用的什么连接试剂盒
2楼2013-08-12 13:37:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mamadexiao

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-08-13 09:11:58
作对照了么?
抗性对了了?
你转化完恢复的时候,培养基用没用有抗性的啊?
3楼2013-08-12 21:39:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zugur

新虫 (初入文坛)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-08-13 09:12:11
检测一下你载体的抗性基因跟你加在皿里的药是不是一样,我见过这样的失败例。

另外,双酶切出的克隆本就少,如果可以皿里多涂菌液。
4楼2013-08-13 07:15:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] FileCode能看出啥? +8 要乐观耀哥 2026-08-10 23/1150 2026-08-13 00:35 by 要乐观耀哥
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +22 Lanmanbaby 2026-08-09 36/1800 2026-08-12 22:50 by sdfapple719
[基金申请] 不应该看fileCode +5 且听虎啸 2026-08-12 6/300 2026-08-12 16:26 by Tide man
[基金申请] 好奇怪的filecode +5 布布和一二 2026-08-08 6/300 2026-08-12 16:11 by 云上清扬
[基金申请] filecode +13 documentary 2026-08-10 15/750 2026-08-12 15:56 by 云上清扬
[论文投稿] 职称评审,求友友推荐见刊最快的期刊 +4 工厂打螺丝 2026-08-08 4/200 2026-08-12 09:18 by hansi2025
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +8 Tide man 2026-08-10 9/450 2026-08-11 20:39 by beefly
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[硕博家园] 读博的好处 +3 lnee 2026-08-11 3/150 2026-08-11 18:10 by 希望我好好的
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +3 布布和一二 2026-08-11 4/200 2026-08-11 15:20 by aasahr
[基金申请] 听说今天filecode变了 +26 布布和一二 2026-08-06 49/2450 2026-08-11 13:18 by WH3796
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 关于代码变化问题,想知道的进来 +17 且听虎啸 2026-08-07 24/1200 2026-08-10 18:35 by zhangduo2008
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +5 布布和一二 2026-08-07 5/250 2026-08-09 16:15 by 袁向阳007
[基金申请] 关于filecode,很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +5 yang182083 2026-08-06 7/350 2026-08-08 18:29 by zhanghaozhu
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制,评价高的钱多评价低的钱少,但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
信息提示
请填处理意见