24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 979  |  回复: 7
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

33ggdf

新虫 (小有名气)

[交流] 这两个酶切位点有问题吗? 已有4人参与

最近本人在做Spe1和Sac1这两个酶的双酶切连接实验,可是连接后做热击转化就是不长单菌落,回收分别测了浓度,摩尔比是1:3-1:10,连接时16℃过夜,涂皿再过夜,就是不长单菌落,是什么原因??急得很呐 郁闷!!!!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zugur

新虫 (初入文坛)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-08-13 09:12:11
检测一下你载体的抗性基因跟你加在皿里的药是不是一样,我见过这样的失败例。

另外,双酶切出的克隆本就少,如果可以皿里多涂菌液。
4楼2013-08-13 07:15:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

yhbletter

铜虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-08-12 17:00:13
1,你这两种酶是哪个公司的
2,你的载体骨架和片段双酶切后分别是多大,是哪个载体
3,抗性是什么
4,用的什么连接试剂盒
2楼2013-08-12 13:37:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mamadexiao

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-08-13 09:11:58
作对照了么?
抗性对了了?
你转化完恢复的时候,培养基用没用有抗性的啊?
3楼2013-08-12 21:39:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

卷舒_ray

金虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2013-08-13 09:12:18
这玩意最关键的是对照
转化阳性对照;
连接反应不加外源片段只有双酶切载体的对照——这是常常被忽略的对照,然而只有这个对照没有转化产物才能说明至少你的双酶切是成功的然后才能将重点放在连接的比例上。
5楼2013-08-13 09:05:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0703化学/290求调剂/本科经历丰富/工科也可 +13 丹青奶盖 2026-03-26 15/750 2026-03-30 12:35 by fangnagu
[考研] 279求调剂 +6 j的立方 2026-03-29 6/300 2026-03-30 11:46 by 松花缸1201
[考研] 297求调剂 +13 田洪有 2026-03-26 13/650 2026-03-30 11:33 by 替代品000
[考研] 化学308分调剂 +7 你好明天你好 2026-03-30 7/350 2026-03-30 11:02 by 1172367218
[考研] 307求调剂 +9 超级伊昂大王 2026-03-24 10/500 2026-03-29 20:26 by 永字号
[考研] 求调剂,一志愿 南京航空航天大学 ,080500材料科学与工程学硕,总分289分 +7 @taotao 2026-03-29 7/350 2026-03-29 12:03 by longlotian
[考研] 298求调剂 +4 种圣赐 2026-03-28 4/200 2026-03-29 08:42 by q1092522407
[考研] 329求调剂 +7 星野? 2026-03-26 7/350 2026-03-29 06:43 by 544594351
[考研] 本科新能源科学与工程,一志愿华理能动285求调剂 +7 AZMK 2026-03-28 11/550 2026-03-28 21:01 by xxxsssccc
[考研] 食品工程专硕一志愿中海洋309求调剂 +4 小张zxy张 2026-03-26 8/400 2026-03-28 19:25 by lbsjt
[考研] 347求调剂 +3 山顶见α 2026-03-25 3/150 2026-03-28 14:13 by 唐沐儿
[考研] 346求调剂 一志愿070303有机化学 +3 萝卜炖青菜 2026-03-28 3/150 2026-03-28 14:11 by 唐沐儿
[考研] 308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-27 7/350 2026-03-28 07:43 by 热情沙漠
[考研] 材料求调剂 一志愿哈工大总分298分,前三科223分 +5 dongfang59 2026-03-27 5/250 2026-03-28 04:53 by wxiongid
[考研] 266求调剂 +11 阳阳哇塞 2026-03-27 12/600 2026-03-27 17:56 by yu221
[考研] 考研调剂 +9 小蜡新笔 2026-03-26 9/450 2026-03-27 11:10 by 不吃魚的貓
[考研] 求调剂 +6 林之夕 2026-03-24 6/300 2026-03-27 08:38 by hypershenger
[考研] 材料调剂 +8 匹克i 2026-03-23 8/400 2026-03-27 08:11 by hypershenger
[考研] 各位老师您好:本人初试372分 +5 jj涌77 2026-03-25 6/300 2026-03-25 14:15 by mapenggao
[考研] 293求调剂 +7 加一一九 2026-03-24 7/350 2026-03-25 12:02 by userper
信息提示
请填处理意见