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liuyi8203

金虫 (小有名气)

[求助] PCR退火温度 Tm值

合成了引物,引物单子上的 %GC, %GC  Tm,Therm. Tm分别表示什么意思?做PCR的时候应该选哪一个作为退火温度呢?谢谢!

[ Last edited by liuyi8203 on 2013-8-9 at 09:56 ]
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堍仔

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
其实我觉得那个只是个参考吧,我一把引物回来我会自己做个温度梯度,这样比较好,如果一直就死死的用那个温度的话。。。。嗯。。。。那个撒
7楼2013-08-11 15:15:33
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查看全部 7 个回答

一直寂寞的鱼

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-08-09 13:02:19
一般退火温度为上游引物的TM值和下游引物的TM值相加后除以2,再减3为一般 退火温度,但是不绝对,可以做梯度确定具体的退火温度!
幸福永远
2楼2013-08-09 09:57:17
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liuyi8203

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 一直寂寞的鱼 at 2013-08-09 09:57:17
一般退火温度为上游引物的TM值和下游引物的TM值相加后除以2,再减3为一般 退火温度,但是不绝对,可以做梯度确定具体的退火温度!

请看清楚题目,谢谢!
3楼2013-08-09 10:04:04
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nannanz2012

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流经验! 2013-08-09 13:02:28
我们一般以上下游引物的Tm值中的较小的那个减去3到5度,进行PCR扩增
4楼2013-08-09 10:06:00
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