24小时热门版块排行榜    

查看: 3029  |  回复: 9

淡水三年

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR退火温度为什么要设置程序升温? 已有3人参与

最近做PCR,文献中的PCR条件中退火温度是50~60°C,1min,很不明白这个温度条件是什么意思,在PCR仪上要怎么设定?
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

核酸生物学实验经验

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ksws0465326

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
淡水三年: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-08-19 19:34:46
是退火温度梯度实验吧,同一个体系下,不同的退火温度,可能会有不同的结果条带,看在哪个温度下扩增的最好,条带清晰单一,在合成一个新的质粒或基因组插入片段之类的,有时会应用到退火温度梯度实验,和引物浓度梯度,模板浓度梯度等等,根据实际情况而定。至于怎么设定,有可以做这个的PCR仪,设置一个最低退火温度,和一个最高的退火温度,每一个竖排都是一个温度,把样品放入你想用的温度里就行,如果没有这种PCR仪,只能多用几台PCR仪了,每台设定不同的退火温度进行试验。希望对你有所帮助。
2楼2014-08-18 20:17:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

孙妙妙

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-08-19 20:39:38
是温度梯度的意思,百乐的PCR仪就有这个功能,一般用来摸索退火温度的,设一个温度范围会有8个温度,你可以8个都做,也可以选其中的温度做
好好做实验!
3楼2014-08-18 22:38:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

XOooZzz

银虫 (小有名气)

也许他的意思只是这个温度范围内随便哪个都可以做。
4楼2014-08-19 07:57:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jpfwx

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-08-19 20:39:47
这个应该是说程序退火温度,例如60-50℃,每个循环降低0.5或者1℃,这样可以保证在不同退火温度下都能扩增出你想要的目的条带,然后根据引物的退火温度继续扩增35cycles。大部分PCR仪都有这个功能的。
也可以像二楼说的,先摸索退火温度。
年轻,拼搏
5楼2014-08-19 08:57:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

淡水三年

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by ksws0465326 at 2014-08-18 20:17:05
是退火温度梯度实验吧,同一个体系下,不同的退火温度,可能会有不同的结果条带,看在哪个温度下扩增的最好,条带清晰单一,在合成一个新的质粒或基因组插入片段之类的,有时会应用到退火温度梯度实验,和引物浓度梯 ...

今天做了一下,条带出来了,但不是目标条带,根据文献,目标条带应该是389bp,但是我跑出来是750bp,跑了两次都这样,能不能帮忙分析下怎么回事?
6楼2014-08-19 19:39:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

淡水三年

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by XOooZzz at 2014-08-19 07:57:11
也许他的意思只是这个温度范围内随便哪个都可以做。

今天做了一下,确实都能出条带,可惜都没有目标条带,跑出来比目标条带多了一倍
7楼2014-08-19 19:41:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ksws0465326

金虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 淡水三年 at 2014-08-19 19:39:12
今天做了一下,条带出来了,但不是目标条带,根据文献,目标条带应该是389bp,但是我跑出来是750bp,跑了两次都这样,能不能帮忙分析下怎么回事?...

大概说下你的反应内容,一,用的什么模板?质粒还是基因组,模板用内切酶鉴定是否正确,二,使用引物是否正确?三,用的什么聚合酶?Taq,EX Taq还是其他的?四,反应体系,和条件具体是怎样的?有时虽然文献是那么写的,但你实际操作起来不一定适合你的这个反应,各种物质的浓度,在体系中的浓度等等。你说跑出来是750bp我觉得很大程度上是引物弄错了。
8楼2014-08-19 21:16:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jpfwx

金虫 (小有名气)

最大可能是引物的问题,序列不对,专一性不够。
年轻,拼搏
9楼2014-08-21 09:05:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liuzhenhai

铁杆木虫 (正式写手)

保密需要。

[ 发自小木虫客户端 ]
10楼2014-08-21 09:33:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 淡水三年 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 调剂 +8 调剂的考研学生 2026-03-09 8/400 2026-03-15 22:14 by Winj1e
[考研] 机械专硕调剂 +3 笨笨兔子 2026-03-12 3/150 2026-03-15 20:02 by 栗子粥?
[考研] 东南大学364求调剂 +3 JasonYuiui 2026-03-15 3/150 2026-03-15 18:57 by 无际的草原
[考研] 321求调剂 +3 大米饭! 2026-03-15 3/150 2026-03-15 17:48 by 哈哈哈哈嘿嘿嘿
[考研] 268求调剂 +5 一定有学上- 2026-03-14 6/300 2026-03-14 22:20 by 运气yunqi
[考研] 中科大材料专硕319求调剂 +3 孟鑫材料 2026-03-13 3/150 2026-03-14 18:10 by houyaoxu
[基金申请] 面上和青基一样限30页不合理 +5 wowsunflower 2026-03-10 7/350 2026-03-14 17:21 by kingkocxr
[考研] 复试调剂 +4 z1z2z3879 2026-03-14 5/250 2026-03-14 16:30 by JourneyLucky
[考研] 308求调剂 +4 是Lupa啊 2026-03-09 4/200 2026-03-14 02:06 by tranquil_ya
[考研] 265求调剂 +9 小木虫085600 2026-03-09 12/600 2026-03-14 01:11 by JourneyLucky
[考研] 26考研调剂 +3 ying123. 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:18 by JourneyLucky
[考研] 泣血叩求调剂恩,愿以丹心报师恩 +6 Iuruoh 2026-03-11 6/300 2026-03-13 22:06 by JourneyLucky
[考研] 工科材料085601 279求调剂 +8 困于星晨 2026-03-12 10/500 2026-03-13 15:42 by ms629
[考研] 工科调剂 +4 Jiang191123! 2026-03-11 4/200 2026-03-13 15:15 by Miko19
[考研] 0703一志愿211 285分求调剂 +4 ly3471z 2026-03-13 4/200 2026-03-13 13:00 by JourneyLucky
[考研] 0856化学工程280分求调剂 +4 shenzxsn 2026-03-11 4/200 2026-03-13 11:55 by ymwdoctor
[考研] 268求调剂 +4 好运连绵不绝 2026-03-12 4/200 2026-03-13 10:45 by hyswxzs
[考研] 一志愿江南大学085701环境工程专硕总分287求调剂 +5 18266118446 2026-03-09 5/250 2026-03-11 16:51 by 2020015
[考研] 083000环境科学与工程调剂 +8 mingmingry 2026-03-09 9/450 2026-03-11 10:23 by 沙漠之狐994
[考研] 化工0817调剂 +8 灿若星晨 2026-03-10 8/400 2026-03-10 22:44 by 星空星月
信息提示
请填处理意见