应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR退火温度为什么要设置程序升温？
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
101/1返回列表
查看: 3074  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

淡水三年

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR退火温度为什么要设置程序升温？ 已有3人参与

最近做PCR，文献中的PCR条件中退火温度是50~60°C，1min，很不明白这个温度条件是什么意思，在PCR仪上要怎么设定？
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

核酸生物学实验经验

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-08-18 19:17:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ksws0465326

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
淡水三年: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-08-19 19:34:46
是退火温度梯度实验吧，同一个体系下，不同的退火温度，可能会有不同的结果条带，看在哪个温度下扩增的最好，条带清晰单一，在合成一个新的质粒或基因组插入片段之类的，有时会应用到退火温度梯度实验，和引物浓度梯度，模板浓度梯度等等，根据实际情况而定。至于怎么设定，有可以做这个的PCR仪，设置一个最低退火温度，和一个最高的退火温度，每一个竖排都是一个温度，把样品放入你想用的温度里就行，如果没有这种PCR仪，只能多用几台PCR仪了，每台设定不同的退火温度进行试验。希望对你有所帮助。
赞一下 回复此楼
2楼2014-08-18 20:17:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

孙妙妙

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-08-19 20:39:38
是温度梯度的意思，百乐的PCR仪就有这个功能，一般用来摸索退火温度的，设一个温度范围会有8个温度，你可以8个都做，也可以选其中的温度做
赞一下 回复此楼
好好做实验！
3楼2014-08-18 22:38:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

XOooZzz

银虫 (小有名气)
也许他的意思只是这个温度范围内随便哪个都可以做。
赞一下 回复此楼
4楼2014-08-19 07:57:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jpfwx

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-08-19 20:39:47
这个应该是说程序退火温度，例如60-50℃，每个循环降低0.5或者1℃，这样可以保证在不同退火温度下都能扩增出你想要的目的条带，然后根据引物的退火温度继续扩增35cycles。大部分PCR仪都有这个功能的。
也可以像二楼说的，先摸索退火温度。
赞一下 回复此楼
年轻，拼搏
5楼2014-08-19 08:57:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

淡水三年

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ksws0465326 at 2014-08-18 20:17:05
是退火温度梯度实验吧，同一个体系下，不同的退火温度，可能会有不同的结果条带，看在哪个温度下扩增的最好，条带清晰单一，在合成一个新的质粒或基因组插入片段之类的，有时会应用到退火温度梯度实验，和引物浓度梯 ...

今天做了一下，条带出来了，但不是目标条带，根据文献，目标条带应该是389bp，但是我跑出来是750bp，跑了两次都这样，能不能帮忙分析下怎么回事？
赞一下 回复此楼
6楼2014-08-19 19:39:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

淡水三年

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by XOooZzz at 2014-08-19 07:57:11
也许他的意思只是这个温度范围内随便哪个都可以做。

今天做了一下，确实都能出条带，可惜都没有目标条带，跑出来比目标条带多了一倍
赞一下 回复此楼
7楼2014-08-19 19:41:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ksws0465326

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 淡水三年 at 2014-08-19 19:39:12
今天做了一下，条带出来了，但不是目标条带，根据文献，目标条带应该是389bp，但是我跑出来是750bp，跑了两次都这样，能不能帮忙分析下怎么回事？...

大概说下你的反应内容，一，用的什么模板？质粒还是基因组，模板用内切酶鉴定是否正确，二，使用引物是否正确？三，用的什么聚合酶？Taq，EX Taq还是其他的？四，反应体系，和条件具体是怎样的？有时虽然文献是那么写的，但你实际操作起来不一定适合你的这个反应，各种物质的浓度，在体系中的浓度等等。你说跑出来是750bp我觉得很大程度上是引物弄错了。
赞一下 回复此楼
8楼2014-08-19 21:16:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jpfwx

金虫 (小有名气)
最大可能是引物的问题，序列不对，专一性不够。
赞一下 回复此楼
年轻，拼搏
9楼2014-08-21 09:05:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liuzhenhai

铁杆木虫 (正式写手)
保密需要。

[ 发自小木虫客户端 ]
回复此楼
10楼2014-08-21 09:33:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 淡水三年 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 298求调剂 +7 manman511 2026-04-05 7/350 2026-04-05 10:29 by 唐沐儿
[考研] 材料调剂 +7 dxy调剂 2026-04-04 7/350 2026-04-05 09:15 by 陌秋26
[考研] 找调剂 +7 楚乔乔 2026-04-01 7/350 2026-04-05 09:07 by dick_runner
[考研] 材料334求调剂 +15 Eecho# 2026-04-03 15/750 2026-04-04 23:05 by 无际的草原
[考研] 11408,335分，本科211，求调剂，可转专业 +5 鳄梨大鳄鱼 2026-04-03 5/250 2026-04-04 22:49 by chongya
[考研] 一志愿南农090401，268，求调剂 +5 一木鸟然 2026-04-04 5/250 2026-04-04 17:07 by babysonlkd
[考研] 272求调剂 +4 松柏常青5 2026-04-03 4/200 2026-04-04 17:03 by babysonlkd
[考研] 22408，264求调剂 +3 ywh729 2026-04-03 4/200 2026-04-04 11:04 by ywh729
[考研] 兽医调剂 +3 wh119216 2026-04-02 3/150 2026-04-03 19:34 by zrongyan
[考研] 五邑大学土木工程招调剂生2026 +3 wyutj 2026-03-31 4/200 2026-04-03 18:21 by zengxj_7201
[考研] 考研调剂 +3 Draa 2026-04-03 3/150 2026-04-03 17:37 by hgwz7468
[考研] 学硕机械工程303求调剂 +6 无名所以叫吴明 2026-03-30 7/350 2026-04-03 16:48 by asdfzly
[考研] 295求调剂 +7 愿旅途永远坦然 2026-04-02 7/350 2026-04-03 08:22 by fangshan711
[考研] 085601一志愿中山大学深圳材料工程330求调剂 +8 pipiver 2026-03-30 8/400 2026-04-02 12:01 by ms629
[考研] 0710生物学，325求调剂 +3 mkkkkkl 2026-04-01 3/150 2026-04-02 09:48 by Jaylen.
[考研] 070300化学279求调剂 +15 哈哈哈^_^ 2026-03-31 17/850 2026-04-01 21:37 by 给你你注意休息
[考研] 262求调剂 +9 励志一定发文章 2026-03-31 10/500 2026-04-01 12:22 by sunshine0013
[考研] 材料科学与工程求调剂 +13 深V宿舍吧 2026-03-29 13/650 2026-03-31 19:50 by Dyhoer
[考研] 本2一志愿C9-333分，材料科学与工程，求调剂 +9 升升不降 2026-03-31 9/450 2026-03-31 18:01 by 无际的草原
[考研] 293求调剂 +3 末未mm 2026-03-30 5/250 2026-03-30 17:23 by 王保杰33
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭