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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR退火温度为什么要设置程序升温？
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淡水三年

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR退火温度为什么要设置程序升温？ 已有3人参与

最近做PCR，文献中的PCR条件中退火温度是50~60°C，1min，很不明白这个温度条件是什么意思，在PCR仪上要怎么设定？
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1楼 2014-08-18 19:17:17
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XOooZzz

银虫 (小有名气)
也许他的意思只是这个温度范围内随便哪个都可以做。
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4楼2014-08-19 07:57:11
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ksws0465326

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
淡水三年: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-08-19 19:34:46
是退火温度梯度实验吧，同一个体系下，不同的退火温度，可能会有不同的结果条带，看在哪个温度下扩增的最好，条带清晰单一，在合成一个新的质粒或基因组插入片段之类的，有时会应用到退火温度梯度实验，和引物浓度梯度，模板浓度梯度等等，根据实际情况而定。至于怎么设定，有可以做这个的PCR仪，设置一个最低退火温度，和一个最高的退火温度，每一个竖排都是一个温度，把样品放入你想用的温度里就行，如果没有这种PCR仪，只能多用几台PCR仪了，每台设定不同的退火温度进行试验。希望对你有所帮助。
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2楼2014-08-18 20:17:05
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孙妙妙

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-08-19 20:39:38
是温度梯度的意思，百乐的PCR仪就有这个功能，一般用来摸索退火温度的，设一个温度范围会有8个温度，你可以8个都做，也可以选其中的温度做
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好好做实验！
3楼2014-08-18 22:38:23
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jpfwx

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-08-19 20:39:47
这个应该是说程序退火温度，例如60-50℃，每个循环降低0.5或者1℃，这样可以保证在不同退火温度下都能扩增出你想要的目的条带，然后根据引物的退火温度继续扩增35cycles。大部分PCR仪都有这个功能的。
也可以像二楼说的，先摸索退火温度。
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年轻，拼搏
5楼2014-08-19 08:57:44
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