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淡水三年

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR退火温度为什么要设置程序升温? 已有3人参与

最近做PCR,文献中的PCR条件中退火温度是50~60°C,1min,很不明白这个温度条件是什么意思,在PCR仪上要怎么设定?
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XOooZzz

银虫 (小有名气)

也许他的意思只是这个温度范围内随便哪个都可以做。
4楼2014-08-19 07:57:11
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ksws0465326

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
淡水三年: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-08-19 19:34:46
是退火温度梯度实验吧,同一个体系下,不同的退火温度,可能会有不同的结果条带,看在哪个温度下扩增的最好,条带清晰单一,在合成一个新的质粒或基因组插入片段之类的,有时会应用到退火温度梯度实验,和引物浓度梯度,模板浓度梯度等等,根据实际情况而定。至于怎么设定,有可以做这个的PCR仪,设置一个最低退火温度,和一个最高的退火温度,每一个竖排都是一个温度,把样品放入你想用的温度里就行,如果没有这种PCR仪,只能多用几台PCR仪了,每台设定不同的退火温度进行试验。希望对你有所帮助。
2楼2014-08-18 20:17:05
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孙妙妙

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-08-19 20:39:38
是温度梯度的意思,百乐的PCR仪就有这个功能,一般用来摸索退火温度的,设一个温度范围会有8个温度,你可以8个都做,也可以选其中的温度做
好好做实验!
3楼2014-08-18 22:38:23
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jpfwx

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-08-19 20:39:47
这个应该是说程序退火温度,例如60-50℃,每个循环降低0.5或者1℃,这样可以保证在不同退火温度下都能扩增出你想要的目的条带,然后根据引物的退火温度继续扩增35cycles。大部分PCR仪都有这个功能的。
也可以像二楼说的,先摸索退火温度。
年轻,拼搏
5楼2014-08-19 08:57:44
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