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xuelin1987铜虫 (小有名气)
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PCR退火温度的确定
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各位，我做分子是新手，这两天在做目的引物的退火温度梯度试验，就是确定引物的最佳退火温度，我P出来后的电泳图见附件，我想问的是：在引物2那个图中，我用的是同一个引物，同一个样品模板，为什么P了以后产物不在一条直线上？而是倾斜的？是不是没有P出来啊？还是操作问题？还有就是如果P出来了，那亮度我感觉都差不多，我要选哪个温度作为退火温度啊？是不是我选的温度差距有点小，所以P出来后条带亮度差异不大？呵呵，问题有点多哈，请各位大侠帮帮忙，大恩不言谢啊！ 引物2温度梯度试验.JPG.JPG |
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2楼2013-08-18 13:52:35
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条带斜，没关系，只要你把胶放好，不是你认为造成的就可以。不同的退火温度，扩出来的就有可能不一样的大小啊。如果是高保真酶，差别可能大一些，而普通的Taq酶，差别就没那么大。 [ 发自手机版 http://muchong.com/3g ] |
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xuelin19873楼2013-08-18 13:56:39
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