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淡水三年

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR退火温度为什么要设置程序升温? 已有3人参与

最近做PCR,文献中的PCR条件中退火温度是50~60°C,1min,很不明白这个温度条件是什么意思,在PCR仪上要怎么设定?
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淡水三年

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by XOooZzz at 2014-08-19 07:57:11
也许他的意思只是这个温度范围内随便哪个都可以做。

今天做了一下,确实都能出条带,可惜都没有目标条带,跑出来比目标条带多了一倍
7楼2014-08-19 19:41:33
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查看全部 10 个回答

ksws0465326

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
淡水三年: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-08-19 19:34:46
是退火温度梯度实验吧,同一个体系下,不同的退火温度,可能会有不同的结果条带,看在哪个温度下扩增的最好,条带清晰单一,在合成一个新的质粒或基因组插入片段之类的,有时会应用到退火温度梯度实验,和引物浓度梯度,模板浓度梯度等等,根据实际情况而定。至于怎么设定,有可以做这个的PCR仪,设置一个最低退火温度,和一个最高的退火温度,每一个竖排都是一个温度,把样品放入你想用的温度里就行,如果没有这种PCR仪,只能多用几台PCR仪了,每台设定不同的退火温度进行试验。希望对你有所帮助。
2楼2014-08-18 20:17:05
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孙妙妙

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-08-19 20:39:38
是温度梯度的意思,百乐的PCR仪就有这个功能,一般用来摸索退火温度的,设一个温度范围会有8个温度,你可以8个都做,也可以选其中的温度做
好好做实验!
3楼2014-08-18 22:38:23
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XOooZzz

银虫 (小有名气)

也许他的意思只是这个温度范围内随便哪个都可以做。
4楼2014-08-19 07:57:11
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