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PCR退火温度 Tm值
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合成了引物，引物单子上的 %GC， %GC Tm，Therm. Tm分别表示什么意思？做PCR的时候应该选哪一个作为退火温度呢？谢谢！ [ Last edited by liuyi8203 on 2013-8-9 at 09:56 ] |
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+4, MolEPI+1, 鼓励发帖交流！ 2013-08-09 21:54:01
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amisking: 金币+4, MolEPI+1, 鼓励发帖交流！ 2013-08-09 21:54:01
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以上几个楼层都没看清题目呀，难怪楼主生气。首先，楼主设计引物，引物都买来了，竟然不知道引物质量好快的参数？ 1.GC% 表示你设计的引物的G、C两个碱基的含量。G和C是以三个氢键相连，而T和A则是两个氢键相连的。氢键的多少能体现连接的能量，氢键多的不容易被打断。 2.Tm值。Tm值就是DNA裂解温度，指把DNA的双螺旋结构降解一半时的温度。不同序列的DNA，Tm值不同。DNA中G－C含量越高，Tm值越高，成正比关系。 3.therm就。 设计引物是有个关于能量的要求。你可以搜一下看看 4. 退火温度的话没有万能的公式。都是自己找的大概的值（这个值用5楼的公式计算就行），然后有目的的尝试。 好运。。  |
6楼2013-08-09 16:35:35
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4楼2013-08-09 10:06:00
lpzl
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5楼2013-08-09 11:55:11
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其实我觉得那个只是个参考吧，我一把引物回来我会自己做个温度梯度，这样比较好，如果一直就死死的用那个温度的话。。。。嗯。。。。那个撒 7楼2013-08-11 15:15:33
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