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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR退火温度 Tm值
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liuyi8203

金虫 (小有名气)

[求助] PCR退火温度 Tm值

合成了引物，引物单子上的 %GC， %GC  Tm，Therm. Tm分别表示什么意思？做PCR的时候应该选哪一个作为退火温度呢？谢谢！

[ Last edited by liuyi8203 on 2013-8-9 at 09:56 ]
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1楼 2013-08-09 09:14:17
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回帖置顶 ( 共有1个 )

任_强

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+4, MolEPI+1, 鼓励发帖交流！ 2013-08-09 21:54:01
以上几个楼层都没看清题目呀，难怪楼主生气。首先，楼主设计引物，引物都买来了，竟然不知道引物质量好快的参数？
1.GC% 表示你设计的引物的G、C两个碱基的含量。G和C是以三个氢键相连，而T和A则是两个氢键相连的。氢键的多少能体现连接的能量，氢键多的不容易被打断。
2.Tm值。Tm值就是DNA裂解温度，指把DNA的双螺旋结构降解一半时的温度。不同序列的DNA，Tm值不同。DNA中G－C含量越高，Tm值越高，成正比关系。
3.therm就。 设计引物是有个关于能量的要求。你可以搜一下看看
4. 退火温度的话没有万能的公式。都是自己找的大概的值（这个值用5楼的公式计算就行），然后有目的的尝试。
好运。。
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微生物行业的初学者，望大牛们不吝赐教
6楼2013-08-09 16:35:35
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普通回帖

一直寂寞的鱼

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-08-09 13:02:19
一般退火温度为上游引物的TM值和下游引物的TM值相加后除以2，再减3为一般 退火温度，但是不绝对，可以做梯度确定具体的退火温度！
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幸福永远
2楼2013-08-09 09:57:17
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liuyi8203

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 一直寂寞的鱼 at 2013-08-09 09:57:17
一般退火温度为上游引物的TM值和下游引物的TM值相加后除以2，再减3为一般 退火温度，但是不绝对，可以做梯度确定具体的退火温度！

请看清楚题目，谢谢！
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3楼2013-08-09 10:04:04
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nannanz2012

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流经验！ 2013-08-09 13:02:28
我们一般以上下游引物的Tm值中的较小的那个减去3到5度，进行PCR扩增
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4楼2013-08-09 10:06:00
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lpzl

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
退火温度Tm=（T+A）X 2+（G+C）X 4 — 5
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Start_everyday_with_a_new_hope,_leave_bad_memories...
5楼2013-08-09 11:55:11
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堍仔

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
其实我觉得那个只是个参考吧，我一把引物回来我会自己做个温度梯度，这样比较好，如果一直就死死的用那个温度的话。。。。嗯。。。。那个撒
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7楼2013-08-11 15:15:33
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