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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR 退火温度求助。。。
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abc5401908

银虫 (初入文坛)

[求助] PCR 退火温度求助。。。 已有7人参与

F     5'  CCCAAG CTTATGGCACTGATGCAGGAACTGTATA  3'    Tm 62.9   Hind3
R     5'  ACGCG TCG AC CA ACTGGCTGGAAACAGAGCCT  3'     Tm 58.8    Sal1


54℃，56℃ 退火温度都试过了，都没P出，想求教多少退火温度，全长1500bp。
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蓝扑扑
1楼 2015-04-16 19:49:33
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for5

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2015-04-17 10:48:32
降低温度，50或者更低，直到p出目的条带，割胶回收。或者用touchdown，逐渐升高或者降低温度
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操蛋的XX
2楼2015-04-16 21:31:27
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默背心碎

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
做个温度梯度PCR
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多多指教
3楼2015-04-16 21:56:00
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甲方不怕乙方

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2015-04-17 10:48:36
同意楼上的，你直接做过温度梯度确定一下最佳退火温度不就行了，从50到60估计就可以了
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我要让你的生活因为有我而更精彩
4楼2015-04-16 21:59:27
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亲叫我石头

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一般比合成引物表上的低3～5度，试试

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5楼2015-04-17 10:47:50
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MarchZR

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你只是摸索退火温度，也许问题就不在这儿，虽然退火温度较重要，分子实验应全面考虑，模板本身存在问题或是使用的Taq酶性能差，还有对镁离子浓度也要进行优化，buffer等，都可能扩增不出来，好运
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6楼2015-04-17 11:26:56
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中国穿青小生

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
水稻 一般用的都是58度和60度

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必须加油哦！
7楼2015-04-17 11:36:14
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edwef

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你先做个梯度，不然盲目的P，很难摸索到最适退火温度
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8楼2015-04-19 14:17:48
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